[发明专利]一种箭叶淫羊藿叶柄组培快繁方法

说明书

本发明公开了一种箭叶淫羊藿叶柄组培快繁方法，通过叶柄诱导出愈伤组织、再分化形成不定芽或丛生芽、进而诱导生成须根等一系列步骤形成完整的植株，然后通过炼苗和育苗处理形成适应自然条件的健壮苗。本发明具有操作简单，取材时间长、繁殖率高，繁殖周期短，成本低，炼苗后存活率高等优点，适宜于大规模工厂化生产，对淫羊藿资源的可持续利用具有促进作用。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，更具体涉及一种箭叶淫羊藿叶柄组培快繁方法。

背景技术

淫羊藿是我国的大宗常用中药材传统中药，具有补肾阳、强筋骨、提高免疫力、抗癌、保护神经等作用，以其为原料的药品涉及各种剂型，有几十种之多。《中国药典》收录了5种淫羊藿属植物，箭叶淫羊藿是其中分布最为广泛的物种，广布于我国的华东、华中和西南诸省，使用量较大。随着对箭叶淫羊藿野生资源掠夺式采挖，其野生资源破坏严重，人工种植迫在眉睫。但是，传统的箭叶淫羊藿繁殖方式主要是地下根茎的分株繁殖和种子繁殖，分株繁殖繁殖系数低，种子繁殖周期长，难以满足箭叶淫羊藿规模化种植对种苗的需求。

植物组织培养技术是最有效的繁殖技术，已经广泛应用于作物、园林、药用植物的快速繁殖。目前，组培技术在箭叶淫羊藿种苗生产上应用较少，关于箭叶淫羊藿叶柄为外植体组培快繁的方法还未见报道。

本发明提供了一套箭叶淫羊藿叶柄为外植体组培快繁方法，可以为箭叶淫羊藿规模化种植奠定良好的基础。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种箭叶淫羊藿叶柄组培快繁方法，以箭叶淫羊藿叶柄为外植体，进行箭叶淫羊藿的组培快繁，该方法易于操作，取材时间长，低成本，高成活率，为箭叶淫羊藿的规模化生产提供了参考。

为进一步实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种箭叶淫羊藿叶柄组培快繁方法，包括以下步骤：

(1)叶柄消毒：采自中国科学院武汉植物园过渡圃的箭叶淫羊藿植株上采集新鲜健康无病害的叶柄，截成约2-2.5cm小段，将外植体材料置于1:800的百菌清可湿性粉剂水溶液中浸泡15分钟，然后捞出叶柄移至500ml的大烧杯盖上纱布置于自来水下冲洗1小时后沥干，最后转入超净工作台中用75％的酒精溶液消毒25-35s，期间不断用灭过菌的镊子轻轻搅拌，取出用无菌水漂洗3-4次除去残留的酒精；接着用0.1％升汞消毒8分钟，无菌水漂洗3-4次，然后置于灭过菌的滤纸除去残留的水分备用。

(2)诱导外植体生成愈伤组织：在超净台中将消过毒的叶柄用灭过菌的解剖刀切去两端充分消毒(同步骤(1)消毒过程)创口，切成1.5-2cm茎段，将茎段用解剖刀沿叶柄纵向划伤2-3处创口(创口一般与茎段等长，深度为叶柄直径的1/3)，然后将创口轻贴于愈伤组织诱导培养基，确保创口处能够充分吸收营养成分；在光强1000-2000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃；约20天即可长出愈伤组织，每25天更换一次培养基，所换的继代培养基配方与原培养基一致，进行愈伤组织的增殖，25天统计一次愈伤组织诱导率与增长率。

(3)诱导愈伤组织分化出不定芽或丛生芽：将诱导产生的愈伤组织转接到不定芽诱导培养基上，在光强1500-3000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃，约20天可看到诱导不定芽的形成，30天后统计一次不定芽诱导率。

芽的增殖培养：切取单个不定芽接种到丛生芽增殖培养基中，进行芽的增殖培养，在光强1500-3000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃，诱导形成丛生芽，30天后统计一次丛生芽增殖系数。

(4)诱导芽体形成须根：无菌条件下切取单个粗壮芽体，接种于生根培养基，在光强1500-3000lux，12h/天光照条件下进行培养，培养温度22-26℃，25天之后形成白色须根，30天后统计一次生根率。