[发明专利]一种利用糯玉米幼胚诱导胚性愈伤组织的培养方法

说明书

一种利用糯玉米幼胚诱导胚性愈伤组织的培养方法，以糯玉米的幼胚作为外植体，将外植体接种至愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养，经过继代培养，得到胚性愈伤组织。本发明中的愈伤组织诱导培养基中添加了N6盐、AgNO₃、N6维生素、谷氨酰胺、MES、水解酪蛋白、2,4‑D、脯氨酸等，有效提高糯玉米自交系幼胚的胚性愈伤组织诱导率，获得的愈伤组织色泽淡黄、结构致密、生长旺盛，分化培养后，分化率为72％以上，获得再生植株，整个再生过程的培养时间约需4‑5个月，为糯玉米功能基因的研究奠定技术基础。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种利用糯玉米幼胚诱导胚性愈伤组织的培养方法。

背景技术

糯玉米(Zea mays L.var.certain Kulesh)，又称蔬果玉米，属于鲜食玉米。随着人们对生活健康的追求，膳食结构也随之改变。糯玉米越来越受到消费者的青睐，目前逐渐成为种植业中最具竞争优势和发展潜力的新兴产业之一。

我国糯玉米品种食味品质育种研究已达到较高水平，从分子生物学水平解析糯玉米品质、性状等机制仍是科研人员亟待解决的问题。

建立一个高效的遗传转化体系是基因功能研究开展的前提条件，而建立良好的受体材料再生体系是植物遗传转化的基础，然而糯玉米的再生过程仍然面临着季节限制、诱导率过低等问题。

目前，已经能从玉米不同的外植体中诱导出胚性愈伤组织，如幼胚、成熟胚、茎尖、幼嫩叶段、丛生芽、腋芽、花药、幼嫩花序等，利用玉米幼苗的芽尖和根尖获得高效再生体系，克服了获得幼胚季节的限制。

尽管玉米不同部位的外植体诱导愈伤组织取得了一定的进展，但是玉米的基因型复杂、品系繁多，玉米幼胚、成熟胚、茎尖、幼嫩叶段的诱导率和成苗率仍然较低。

玉米的基因型直接影响愈伤组织诱导效果，研究发现，在同一培养基上不同基因型的愈伤组织诱导率有很大差异，导致愈伤组织状态也有差异，尤其是对于糯玉米，其自交系的诱导率明显低于杂交种。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用糯玉米幼胚诱导胚性愈伤组织的培养方法，可在光照条件下获得胚性愈伤组织，有效提高糯玉米自交系幼胚的胚性愈伤组织诱导率，诱导率提高至50％以上，获得的愈伤组织色泽淡黄、结构致密、生长旺盛，分化培养后，分化率为72％以上，获得再生植株，整个再生过程的培养时间约需4-5个月，为糯玉米功能基因的研究奠定技术基础。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种利用糯玉米幼胚诱导胚性愈伤组织的培养方法，包括以下步骤：

1)选取外植体

取授粉9-14天的糯玉米幼穗，除去包叶、消毒，挑取幼胚作为外植体；

2)诱导愈伤组织

将外植体接种至愈伤组织诱导培养基中进行诱导培养，培养7-10天后盾片膨大，及时去芽及根状体；诱导培养15天后挑选色泽淡黄、结构致密、生长旺盛的愈伤组织进行继代培养，每15-20天继代1次，继代2-3次获得胚性愈伤组织。

进一步，步骤2)中的诱导培养在植物组织培养室光照条件下进行。

优选地，步骤2)中，愈伤组织诱导培养基包括：N6盐4-4.5g/L、AgNO₃ 0.1-10mg/L、N6维生素1-1.2ml/L、谷氨酰胺0-300mg/L、MES 0-500mg/L、水解酪蛋白0-500mg/L、肌醇0-100mg/L、天冬氨酸0-200mg/L、2,4-D 1.5-2mg/L、脯氨酸700-1400mg/L、蔗糖30-35g/L和植物凝胶3-3.5g/L，pH＝5.8-6.0。