[发明专利]一种基于分子网络的废水中致毒有机污染物非目标筛查分析的方法

权利要求书

1.一种基于分子网络的废水中致毒有机污染物非目标筛查分析的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)将预处理后的废水进行固相萃取，得到有机污染物浓缩液；

b)使用配有馏分自动收集器的高效液相色谱仪对有机污染物浓缩液进行分馏，得到待检测馏分；

c)采用高效液相色谱-飞行时间质谱仪对步骤b)中待检测馏分进行分析检测；

d)使用开源分析软件对步骤c)检测所得的质谱数据进行处理，并生成有机污染物之间关联的分子网络，针对网络节点的物质进行分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述的预处理为调节废水的pH＝2～3，过0.45μm的玻璃纤维滤膜。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)中，所述的固相萃取为将预处理后的废水过HLB固相萃取小柱，得到洗脱液；将洗脱液在氮气流下吹至近干，加入甲醇复溶，然后过0.22μm有机滤膜，得到有机污染物浓缩液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)中，所述的高效液相色谱仪对有机污染物浓缩液进行分馏的色谱条件如下：

色谱柱型号：Waters XBridge C18柱，4.6mm×150mm，3.5μm；

检测器：2998光电二极管阵列检测器；

流动相A：超纯水；

流动相B：甲醇；

柱温：30℃；

流速：0.8mL/min；

进样体积：100μL；

运行时间：60min；

采用梯度洗脱模式，见表1；

表1 流动相梯度洗脱参数

馏分收集处理：前20min，每1min收集一个馏分；后40min，每2min收集一个馏分，共收集40个馏分。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)中，所述的待检测馏分为步骤b)中部分待检测馏分或全部待检测馏分；其中，所述的部分待检测馏分为全部待检测馏分中细胞存活率最低的1～5个馏分。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的细胞存活率的检测方法为将步骤b)得到的待检测馏分暴露于人HepG2细胞，用CCK8试剂盒测定细胞存活率，具体包括如下步骤：

1)细胞培养：用DMEM完全培养基培养HepG2细胞；

2)暴露：将步骤1)培养后中的培养液体倒掉，每90μL DMEM完全培养基中加入10μL步骤b)得到的待检测馏分，于5vt％CO₂，37℃培养HepG2细胞24h；

3)CCK8检测：使用CCK8试剂盒测量步骤2)培养所得HepG2细胞的细胞存活率。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的培养为用DMEM完全培养基调整对数期的HepG2至细胞悬液的浓度为1～2×10⁶个/mL，置于37℃，5vt％CO₂，95％相对湿度的恒温培养箱中培养24h。