[发明专利]一种纳米抗体人源化的方法在审
| 申请号： | 202010440008.5 | 申请日： | 2020-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN111635457A | 公开（公告）日： | 2020-09-08 |
| 发明（设计）人： | 俞玲;陆晓峰;雷鸣 | 申请（专利权）人： | 上海药明生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C12N15/13;C12N15/10;C12N15/70;C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 戴广志 |
| 地址： | 201403 上海市奉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 纳米 抗体 人源化 方法 | ||
1.一种纳米抗体人源化的方法，其特征在于，包括步骤：
a.将通用性人源化纳米抗体框架的互补决定区CDR替换为抗体株纳米抗体的互补决定区CDR，对所述对抗体株纳米抗体的框架区FR与所述通用性人源化纳米抗体框架不同的氨基酸，进行回复突变；
b.通过重叠PCR并采用带有回复突变位点的引物对所述回复突变点进行随机组合以构建点回复突变文库；
c.通过第二轮PCR在所述点回复突变文库片段两端引入表达载体开口端重叠片段；
d.将所述点回复突变文库连接表达载体，转化至表达菌株并诱导表达以获得表达产物；
e.筛选高亲和力分子。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述通用性人源化纳米抗体框架为h-NbBcII10FGLA。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b中所述重叠PCR的循环参数为：95℃预变性10秒，95℃变性10秒，50℃-68℃引物退火10秒，68℃引物延伸，循环28次后，最后68℃延伸2分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c中所述第二轮PCR的循环参数为：95℃预变性10秒，95℃变性10秒，50℃-68℃引物退火10秒，68℃引物延伸，循环28次后，最后68℃延伸2分钟。
5.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述表达菌株为E.coli BL21(DE3)。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤d中，所述表达载体电转化至所述表达菌株。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤d中，诱导表达为在ZYM-5052培养基中低温诱导表达48小时。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤e中，通过取所述表达产物的上清液通过ELISA检测筛选高亲和力分子。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述ZYM-5052培养基中包括抗生素Carb。
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