[发明专利]一种生物样品中喹诺酮类抗生素的前处理方法及其定量检测方法

权利要求书

1.一种生物样品中喹诺酮类抗生素的定量检测方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将待测生物样品置于玻璃离心管中，加入待测样液体积10倍的pH＝6的10mmol/L磷酸盐缓冲液，混匀得均一溶液；

(2)将TiO₂-Tb纳米材料按添加量20mg/mL的比例加入到均一溶液中，超声辅助萃取3-8分钟后，于4000r/min离心5分钟，弃去上层溶液，在下层溶液中加入与步骤(1)中磷酸盐缓冲液等体积的质量浓度为4wt％的乙酸溶液中，超声辅助反萃取12-18分钟后，于4000r/min离心5分钟，取上层溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后，即得到用于喹诺酮类抗生素高效液相色谱检测的前处理样品，其中所述的TiO₂-Tb纳米材料的制备方法如下：将20mL钛酸四丁酯溶解在25mL无水乙醇中搅拌30分钟，得到溶液A；同时，将0.1335g六水硝酸铽加入到含10mL醋酸、20mL去离子水和25mL无水乙醇的混合溶液中，搅拌30分钟，得到溶液B；将溶液A缓慢地滴入到溶液B中，于70℃下反应2小时，室温下陈化72小时；将陈化后产物置于100℃烘箱中烘干，再转移至马弗炉中500℃煅烧4小时后冷却至室温，采用石英研钵研磨成粉末，即得到TiO₂-Tb纳米材料；

(3)用甲醇作溶剂配制喹诺酮类抗生素的标准溶液，用高效液相色谱-紫外方法测定喹诺酮类抗生素的标准溶液中各组分的色谱峰保留时间和色谱峰面积，以色谱峰保留时间定性，以浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标绘制出喹诺酮类抗生素的标准曲线，其中喹诺酮类抗生素包括环丙沙星、 莫西沙星和诺氟沙星，各成分浓度范围均为10～10000ng/mL；

(4)喹诺酮类抗生素的HPLC-UV测定条件

液相色谱仪器型号：Agilent 1260Infinity II；色谱柱：型号为Pursuit 5C₁₈，规格为5μm粒径，4.6mm×150mm；进样量：20μL；柱温：25℃；检测器：二极管阵列检测器；检测器波长：环丙沙星和诺氟沙星为278nm，莫西沙星为291nm；流动相A为0.2wt％乙酸溶液，流动相B为乙腈，流速1mL/min，进样量20微升；梯度洗脱程序如下表所示：

表1HPLC梯度洗脱程序

时间，min	A，％	B，％
0.00	85	15
3.00	85	15
3.10	50	50
4.00	50	50
4.10	40	60
7.00	40	60
7.10	85	15
15.00	85	15

(5 )采用外标法对生物样品中喹诺酮类抗生素进行定量分析，获得待测生物样品中环丙沙星、 莫西沙星和诺氟沙星的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种生物样品中喹诺酮类抗生素的定量检测方法，其特征在于：所述的生物样品包括人尿和兔全血。