[发明专利]一株高效抑制金黄色葡萄球菌的解淀粉芽胞杆菌工程菌

权利要求书

1.解淀粉芽胞杆菌（ Bacillus amyloliquefaciens ） 工程菌在抑制金黄色葡萄球菌中的应用，其特征在于，所述工程菌是敲除解淀粉芽胞杆菌HZ-12表面活性素合成基因srfAC所得，所述应用不为疾病的治疗方法，HZ-12的保藏编号是CCTCC NO:M 2015234。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，敲除的基因srfAC的核苷酸序列如 SEQ IDNO .1所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述工程菌的构建方法包括以下步骤：

1）以解淀粉芽胞杆菌HZ-12的基因组DNA为模板，PCR扩增srfAC基因的上游同源臂和srfAC基因的下游同源臂；

2）通过重叠延伸PCR将srfAC基因的上游同源臂和srfAC基因的下游同源臂连接到一起，构成同源臂融合片段；

3）采用XbaI和BamHI限制性内切酶对同源臂融合片段和质粒T2(2)-ori进行双酶切，得到酶切基因片段和线性质粒片段，经DNA连接酶进行连接，得到敲除质粒T2(2)-ΔsrfAC；将敲除质粒T2(2)-ΔsrfAC转入解淀粉芽胞杆菌HZ-12中，以卡那青霉素作为筛选标记，筛选得到阳性转化子；

4）将阳性转化子在45℃条件下转接培养基数次后，进行菌落PCR检测，得到srfAC基因的上游同源臂或srfAC基因的下游同源臂与解淀粉芽胞杆菌HZ-12基因组DNA产生完全单交换的阳性单交换结合子菌株；

5）挑选阳性单交换结合子菌株接种于37℃、不含有卡那青霉素的培养基中经过数次转接培养基，PCR法筛选得到敲除了srfAC基因的解淀粉芽胞杆菌HZΔsrfAC。