[发明专利]一种Nerinetide的制备方法

说明书

本发明提供了一种制备Nerinetide的方法，方法中采用Fmoc‑Val‑树脂为起始树脂，按Nerinetide的氨基序列反相依次接入相应的保护氨基酸得到Nerinetide肽树脂，Nerinetide保护肽树脂经酸解后获得Nerinetide粗品，Nerinetide粗品再经过纯化和冻干得到Nerinetide纯品。本发明工艺操作简单，产品总收率高，适合规模化生产。

技术领域

本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及一种Nerinetide的制备方法。

背景技术

Nerinetide(NA-1)是一种神经保护剂，可干扰突触后密度蛋白95(PSD-95)，通过终止细胞内NO自由基的产生来实现，在临床前缺血性脑卒中模型中可减少脑缺血再灌注的梗死面积，并改善其功能预后。急性缺血性脑卒中(AIS)患者进行EVT治疗现在可以有效实现缺血再灌注。该研究旨在确定静脉注射新型神经肽(NA-1，2.6mg/kg)对选择用于EVT的AIS患者的疗效和安全性。

Nerinetide具有以下的结构：

Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-

Lys-Leu-Ser-Ser-Ile-Glu-Ser-Asp-Val-OH

Nerinetide的制备方法已有很少有报道，本发明提供一种高效的Nerinetide制备方法，以满足医药用途。

发明内容

本发明提供了一种高效的制备方法，采用Fmoc-Val树脂为起始树脂，制备工艺操作简单，产品收率高、纯度高。

本发明提供了一种Nerinetide的制备方法，包括：采用Fmoc-Val-树脂为起始树脂，按Nerinetide的氨基序列反相依次接入相应的保护氨基酸得到Nerinetide肽树脂，Nerinetide保护肽树脂经酸解后获得Nerinetide粗品，Nerinetide粗品再经过纯化和冻干得到Nerinetide纯品。

上述Nerinetide的制备方法中，所述的Fmoc-Val树脂是将载体树脂与Fmoc-Val偶联得到的；其中，所述Fmoc-Val-树脂的取代值为0.2～1.0mmol/g树脂，优选的取代值为0.3～0.5mmol/g树脂。

进一步的，所述载体树脂选自2-Cl Trity-Cl树脂(2-氯三苯甲基氯树脂)、Wang树脂(王树脂)、对羟甲基苯氧甲基聚苯乙烯树脂(HMP树脂)，优选的为Wang树脂。

作为本发明优选的方案，当载体树脂为Wang树脂时，Fmoc-Val与载体树脂的偶联方法为：Fmoc-Val的羧基与树脂中的羟基在偶联剂、活化剂和碱催化剂的作用下发生酯化反应而接入保护氨基酸。

作为本发明优选的方案，当载体树脂为2-Cl Trity-Cl树脂时，Fmoc-Val与载体树脂的偶联方法为：Fmoc-Val的羧基与树脂中的Cl-代烷基在碱的作用下发生酯化反应而接入保护氨基酸。

上述Nerinetide的制备方法中，所述的Fmoc-保护氨基酸或保护氨基酸片段的用量为所投料树脂总摩尔数的1.2～6倍；优选为2.5～3.5倍。

作为本发明优选的方案，所述固相偶联合成法为：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去Fmoc保护基后再与下一个保护氨基酸偶联反应。所述的偶联反应时间为60～300分钟，优选的为100～140分钟。

Nerinetide肽树脂为：

X-Tyr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-