[发明专利]一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷A的方法

权利要求书

1.一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷A的方法，其特征在于包括如下步骤：

种子制备：将已合成的糖基转移酶UGT76G1基因连接到PBR322质粒载体上，将载有基转移酶UGT76G1基因的PBR322质粒载体导转到枯草芽孢杆菌的感受态中，将植入了糖基转移酶UGT76G1基因的枯草芽孢杆菌接入LB培养基，控制LB培养基温度30～37℃，转速100-250rpm，培养时间20～24 h；

（2）种子罐培养：将步骤（1）所得的枯草芽孢杆菌按照1%～10%体积比的接种量接入到装有LB培养基的种子罐中培养，控制种子罐转速为200～400 rpm，通气比为0.1～1 V/V.min，30～37℃温度下培养20～24 h，得到种子培养液；

（3）发酵罐生产：将种子培养液按照1%～10%体积比的接种量，接入装有发酵培养基的发酵罐中培养，控制发酵罐转速为200～1000 rpm，通气比为0.1～2 V/V.min，在30～37 ℃温度下，控制pH为6～8，培养48～72小时，发酵结束得到发酵液；

（4）将步骤（3）所得的发酵液压滤得到枯草芽孢杆菌菌体，随后对枯草芽孢杆菌菌体进行重悬，高压均质破碎得到枯草芽孢杆菌菌体破碎液，随后将枯草芽孢杆菌菌体破碎液进行压滤，得到粗酶液；

（5）催化体系：将甜菊糖苷、尿苷二磷酸葡萄糖、磷酸缓冲液、粗酶液按质量比5-10 ：1-5：40-60 ：5-20 混合，随后在25-40℃下反应时间12-48 h即可得莱鲍迪苷A。

2.根据权利要求1所述一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：步骤（1）中LB培养基的温度为33～35℃，转速150-200 rpm，培养时间22～23 h。

3.根据权利要求1所述一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：步骤（2）中种子罐转速为280～330 rpm，通气比为0.3～0.7 V/V.min，培养温度为33～35℃，培养时间为20～23 h。

4.根据权利要求1所述一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：步骤（3）中发酵罐转速为400～700 rpm，通气比为0.5～1.8 V/V.min，培养温度为30～37℃，pH为6.5～7.5，培养时间为55～65h。

5.根据权利要求1所述一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：步骤（3）中发酵培养基制备方法如下：按照豆饼粉10-40 g、麸皮20-50 g、玉米粉30-60 g、磷酸氢二铵1-10 g、磷酸氢二钠1-10 g、氯化钙0.1-5 g的比例去配制得到发酵培养基，用氢氧化钠溶液调节pH为6～8，用去离子水定容至1000 ml。

6.根据权利要求1所述一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：步骤（4）中重悬时间为10～20min，高压均质破碎的压力为0.1～0.5Mp。

7.根据权利要求1-6任一项所述一种利用枯草芽孢杆菌发酵催化制备莱鲍迪苷A的方法，其特征在于：步骤（3）、（4）中压滤采用的是板框压滤的方法。