[发明专利]基于甲基苯丙胺诱导帕金森无菌小鼠模型构建方法及应用

说明书

本发明属于动物模型构建技术领域，公开了一种基于甲基苯丙胺诱导帕金森无菌小鼠模型构建方法及应用，将甲基苯丙胺腹腔注射构建的帕金森小鼠使用由氨苄青霉素1g/L、甲硝唑1g/L、三硫酸新霉素1g/L和万古霉素1g/L组成的抗生素混合物对小鼠进行喂食；喂食方式为每日3次，持续一周，在喂食抗生素期间小鼠的食物和饮水通过杀菌处理。本发明具有用药剂量小、成功率高、所用时间短、操作简单、对实验动物损伤小等优点，同时具有动物模型应该具备的疾病特征相似性、模拟可行性和有效性、可重复性、实验经济性以及易操作、周期短、危险少等基本特性，为进一步的疾病机制和治疗的研究提供了理想的动物模型。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，尤其涉及一种基于甲基苯丙胺诱导帕金森无菌小鼠模型构建方法及应用。

背景技术

帕金森病是詹姆斯·帕金森于1817年首次发现的一种慢性神经退行性疾病，据统计全球至少1％的老年人群深受此病影响。帕金森病主要表现为患者运动能力的丧失，如震颤、僵硬和运动迟缓，其主要病理变化是中脑黑质多巴胺能神经元的损坏。人体正常运动功能相关的大脑区域通过黑质纹状体通路从黑质致密部神经元接收多巴胺能输入。黑质纹状体多巴胺能通路的持续性退化导致纹状体多巴胺严重缺乏，当纹状体多巴胺减少约80％时，机体将会出现帕金森病的临床症状。纹状体多巴胺缺乏以及由此导致的运动回路的变化被认为是帕金森病临床表现的原因。

目前，有关帕金森病的具体发病机制及其防治措施仍不明了，有待进一步研究。因此，构建动物模型是研究该疾病致病机制和治疗策略的重要辅助手段。现阶段较为公认的建立帕金森动物模型的方法主要有2种：一种是将6-羟基多巴胺注入黑质纹状体系统，损毁大鼠黑质—纹状体系统多巴胺能神经元制成帕金森动物模型，另一种是运用MPTP(可渗透血脑屏障的多巴胺神经毒素)制备猴等灵长类帕金森动物模型和C57BL/6J小鼠帕金森模型。6-羟基多巴胺与多巴胺只差一个羟基，可形成自由基，是一种神经毒素，能够抑制线粒体氧化呼吸链复合物I并激活含半胱氨酸的蛋白酶家族而启动了细胞凋亡过程，从而选择性的损毁多巴胺能神经元。多巴胺能神经元投射有两条通路，即黑质—纹状体通路和新边缘系统通路。前者是黑质与纹状体相连接，后者是中脑腹侧背盖区与纹状体相联系。因此人们常选通路中的黑质致密部、内侧前脑束、纹状体、中脑腹侧背盖区等1个或2个位点进行帕金森疾病造模。6-羟基多巴胺所诱导的帕金森模型不能模拟帕金森病的所有临床症状和病理特征，6-羟基多巴胺不影响大脑其他区域，也不像帕金森病那样导致细胞质内含物(如，路易体)的形成。相比6-羟基多巴胺，运用MPTP诱导帕金森动物模型，大都采用急性给药方案，不能模拟帕金森病的发病特征，而一旦停止给药动物的行为缺陷将会得到恢复，不利于后续研究。此外，MPTP模型没有直接解决系统性线粒体损伤在帕金森病中的作用，MPTP仅在表达多巴胺转运体的细胞，即多巴胺能细胞中抑制复合物I的活性，因此，该模型在运用上存在局限。局限为不能很好模拟帕金森的发病症状，以及停止给药后动物的行为缺陷将得到恢复，由此构建的动物模型不利于针对帕金森病的研究。这些局限的原因主要是机体对MPTP的给药反应是可逆的，另外啮齿动物普遍对MPTP毒性的敏感性较低，如有研究发现实验中白鼠几乎不受MPTP的影响。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：MPTP模型没有直接解决系统性线粒体损伤在帕金森病中的作用，MPTP仅在表达多巴胺转运体的细胞，即多巴胺能细胞中抑制复合物I的活性，在运用上存在不能很好模拟帕金森的发病症状，以及停止给药后动物的行为缺陷将得到恢复，构建的动物模型不利于针对帕金森病的研究。

解决以上问题及缺陷的难度为：需找到一种诱导方案使其诱导的帕金森模型能够很好的符合帕金森的发病机理，克服目前模型上的不足。

解决以上问题及缺陷的意义为：解决以上问题通过新的方案诱导动物帕金森模型能够更好的用于后续对帕金森病理学的研究。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于甲基苯丙胺诱导帕金森无菌小鼠模型构建方法及应用。