[发明专利]测定注射用透明质酸钠复合溶液中盐酸赖氨酸含量的方法

权利要求书

1.一种测定注射用透明质酸钠复合溶液中盐酸赖氨酸含量的方法，其包含下述步骤：

供试品溶液制备：利用透明质酸酶对注射用透明质酸钠复合溶液进行酶解；

标准品溶液制备：将盐酸赖氨酸标准品溶解得到；

检测步骤：使用高效液相色谱法，利用在线衍生技术，检测所述的供试品溶液和标准品溶液，使用外标法确定盐酸赖氨酸的含量；

所述透明质酸酶为细菌酶；

在检测步骤中，流动相采用体积比为90:10-98:2的弱碱溶液:甲醇；

在检测步骤中，检测波长为220-250nm；

衍生化试剂为邻苯二甲醛；

在检测步骤中，使用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在35-45℃酶解。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，在42℃酶解。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，酶解3-3.5h。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，酶解2-3h。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，酶解pH为6.0-6.5。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，在线衍生技术包括下述步骤：将所述供试品溶液与衍生化试剂在缓冲溶液存在下混合。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述缓冲溶液为硼酸盐缓冲溶液。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，在检测步骤中，使用的色谱柱为Poroshell HPH-C18色谱柱。

10.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中，在检测步骤中，流动相采用体积比为97:3-98:2的弱碱溶液:甲醇。

11.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中，在检测步骤中，流动相采用体积比为98:2的弱碱溶液:甲醇。

12.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述弱碱溶液为pH8.0-8.8的溶液。

13.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述弱碱溶液为pH8.2-8.4的溶液。

14.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述弱碱溶液为pH8.2的溶液。

15.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述弱碱溶液为磷酸硼酸盐溶液。

16.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述弱碱溶液为浓度为8-12mmol/L的磷酸硼酸盐溶液。

17.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述弱碱溶液为浓度为8mmol/L的磷酸硼酸盐溶液。

18.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中，在检测步骤中，采用的色谱条件为：流速为1.0-1.5ml/min。

19.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中，在检测步骤中，采用的色谱条件为：流速为1.2-1.5ml/min。

20.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中，在检测步骤中，采用的色谱条件为：流速为1.5ml/min。

21.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其中，在检测步骤中，采用的色谱条件为：检测波长为224-235nm。