[发明专利]人脐带间充质干细胞注射液、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种人脐带间充质干细胞注射液，其特征在于，应用于肝衰竭治疗，所述人脐带间充质干细胞注射液由人脐带间充质干细胞和冻存液组成，所述冻存液由人血白蛋白、临床级二甲基亚砜和复方电解质注射液组成；

所述人脐带间充质干细胞注射液的活细胞密度为0.5×10⁶-2×10⁶个/毫升；

所述冻存液中，所述人血白蛋白占所述冻存液的质量百分比为3-20％，所述临床级二甲基亚砜占所述冻存液的质量百分比为5-10％，余量为所述复方电解质注射液。

2.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞注射液，其特征在于，所述人血白蛋白占所述冻存液的质量百分比为3-15％。

3.一种如权利要求1-2中任一项所述的人脐带间充质干细胞注射液在肝衰竭治疗方面的应用，其特征在于，包括：

使用稀释液对所述人脐带间充质干细胞注射液进行重悬处理，使得到的重悬注射液中的人脐带间充质干细胞的活细胞密度为3×10⁶-4×10⁶个/毫升，然后将所述重悬注射液应用于药物诱导的肝衰竭动物模型。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述稀释液为生理盐水和所述冻存液中的任意一种。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述注射结束的6小时后，所述药物诱导的肝衰竭动物模型血样中的谷丙转氨酶含量、谷草转氨酶含量以及乳酸脱氢酶均下降至少20％，所述注射结束的5小时内，所述药物诱导的肝衰竭动物模型的生存率不低于90％。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，提供实验动物，向所述实验动物注入D-(+)-半乳糖胺盐酸盐溶液和脂多糖溶液，并控制每公斤所述实验动物注入300毫克D-(+)-半乳糖胺盐酸盐以及20微克所述脂多糖，以建立所述药物诱导的肝衰竭动物模型。

7.一种如权利要求1-2中任一项所述的人脐带间充质干细胞注射液的制备方法，其特征在于，包括：

获取人脐带组织，对所述人脐带组织顺次进行接种培养、传代培养和重组酶解离后，得到人脐带间充质干细胞，然后使用所述冻存液对所述人脐带间充质干细胞进行重悬以调整所述人脐带间充质干细胞的活细胞密度为0.5×10⁶-2×10⁶个/毫升，得到所述人脐带间充质干细胞注射液。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，将所述人脐带间充质干细胞注射液进行程序降温处理至-80摄氏度后保存至少12小时，然后置于-135摄氏度下冻存，形成冻存注射液。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述接种培养使用的接种培养基由α-MEM和胎牛血清组成，所述接种培养基中，所述α-MEM的质量百分比为80-95％，所述胎牛血清的质量百分比为5-20％。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述接种培养的时间为18-21天，以获得细胞融合率不低于60％的初代细胞。

11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，对所述初代细胞进行至少5次传代扩增，以完成所述传代培养并使获得的细胞的细胞融合率不低于80％。