[发明专利]三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料及其在抑制基因接合转移中的应用

权利要求书

1.一种三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料，其特征在于，制备时，包括如下步骤：

（1）称取8-16mmol的七水合硫酸亚铁加入15-30ml的去离子水中，作为第一溶液，称取1.6-3.2mmol的次氯酸钠加入到16-32ml去离子水中，作为第二溶液；

（2）将第二溶液逐滴加入到第一溶液中，并不断搅拌，直到出现淡黄色透明溶液，作为第三溶液，将第三溶液移入100ml的聚四氟乙烯高压反应釜中，160-180℃下加热反应12-14h；待冷却到室温后，离心分离得到沉淀物，分别用去离子水和无水乙醇清洗沉淀物， 40-60℃烘干，研磨，得到三氧化二铁纳米粒子；

（3）称取5-10mmol的硫脲和1-2mmol的钼酸钠于60ml去离子水中，再加入0.05-1g的步骤（2）中的三氧化二铁纳米粒子，得到混合液，将混合液置于100ml高压釜中，加热至180-200度，反应20-22小时后，冷却到室温，得到黑色混合沉淀物；

（4）将步骤（3）中的黑色混合沉淀物离心分离，分别用去离子水和无水乙醇洗涤若干次，50-60度干燥得到三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料。

2.根据权利要求1所述的三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料，其特征在于，步骤（2）中，所述将第二溶液逐滴加入到第一溶液中，反应温度为160-180℃，反应时间为12-14小时，干燥温度为40-60℃。

3.利用权利要求1所述的三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料在抑制基因接合转移中的应用，其特征在于，三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料用于抑制基因的水平转移，具体过程如下：

a)实验前准备：准备15ml玻璃试管若干、5ml玻璃试管若干、1.5ml离心管若干、胰酪大豆蛋白胨液体培养基培养液、胰酪大豆蛋白胨固体培养基、磷酸缓冲溶液、，并全部进行高压蒸汽灭菌121度，40分钟，备用；氯霉素、氨苄青霉素、链霉素溶液过滤灭菌，备用；

b)摇菌：取两只15ml玻璃试管，分别加入10-12ml的胰酪大豆蛋白胨液体培养基培养液，其中在接种大肠杆菌DH5α的15ml玻璃试管中加入氯霉素和氨苄青霉素，接种大肠杆菌HB101的15ml玻璃试管中加入链霉素，将15ml玻璃试管置于恒温振荡器，在37度下，160r/min培养14小时，获得供体菌株—携带具有氯霉素和氨苄青霉素抗性的性质粒的大肠杆菌DH5α，受体菌株—具有链霉素抗性的大肠杆菌HB101，并使得菌落计数达到约5×10⁸ CFU/mL；

c)取37度培养过夜的供体大肠杆菌DH5α与受体大肠杆菌HB101用0.2 mol的磷酸缓冲溶液洗涤2~3次以去除菌体中的培养基以及抗生素，再用磷酸缓冲溶液将细菌稀释到设定的浓度；

d)分别取1.5毫升c)中的细菌悬浮液于5ml玻璃试管中并混匀，在5ml玻璃试管分别加入0-0.6mg三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料，并以未加三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料的组份作为对照；

e)将以上加入不同浓度三氧化二铁-硫化钼复合材料的实验组和未加三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料的对照组接合培养，培养结束以后取菌液涂于含氯霉素抗性及链霉素抗性的胰酪大豆蛋白胨固体培养基上，然后30度培养24-36小时；统计各胰酪大豆蛋白胨固体培养基上的菌落数，计算接合转化子以及接合转移频率，然后分析不同剂量的三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料对耐药基因在种内接合转移的影响。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，大肠杆菌DH5α与大肠杆菌HB101是属于同一种属，因此利用大肠杆菌DH5α与大肠杆菌HB101进行的接合实验属于种内接合实验；供受体菌培养时间为14小时，三氧化二铁-硫化钼复合纳米材料的量为0-0.6mg，取接合培养后的菌液涂于含氯霉素抗性及链霉素抗性的胰酪大豆蛋白胨固体培养基后，培养温度为30度，培养时间为24-36小时。