[发明专利]一种抗乙型肝炎病毒e抗原的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是乙型肝炎病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明涉及乙型肝炎病毒e抗原的单克隆抗体，还涉及乙型肝炎病毒e抗原的检测试剂(特别是化学发光法)。

技术领域

本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是乙型肝炎病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明涉及乙型肝炎病毒的单克隆抗体，还涉及乙型肝炎病毒e抗原的检测试剂，特别是化学发光法检测。

背景技术

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，简称HBV)是一种呈世界性分布、危害严重的传染病。目前，乙型肝炎病毒感染已成为世界范围内共同而且重要的公共卫生问题。临床以肝功能异常为主要特征并且伴多样性的临床表现。目前全世界共有3.5亿～4亿慢性HBV感染者，20亿人曾感染HBV，约占全球人口的6％，慢性HBV携带者中有相当一部分发展成为慢性乙型肝炎(CHB)，部分患者发展成为肝硬化患者(HC)、肝细胞癌(HCC)或非致癌性HC并发症，每年因HBV感染而死亡的人数超过110万。

目前临床上用于检测乙型肝炎的主要血清学指标是乙肝六项即：乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)，乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)，乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)，乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)及乙型肝炎病毒核心IgM抗体(HBcAb-IgM)。其中HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一，出现于患者血清转氨酶(ALT)升高前2周～8周，至恢复期HBsAg滴度逐渐降低乃至消失，最终产生保护性的HBsAb。HBeAg与HBcAg由同一启动子控制，其表达可能与HBcAg相关进而与HBV的载量相关，故常被作为HBV活跃复制的血清学指标；同时，HBeAg向HBeAb的转化目前是判断抗病毒药物治疗效果的主要指标。

乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B virus e antigen，HBeAg)是乙型肝炎病毒在人体内复制过程中的一个主要产物，由前c和c基因编码，具有重要的生物学功能。HBeAg是临床判定HBV复制程度及判断慢性乙型肝炎患者预后的重要指标之一，是抗病毒治疗疗效判定的重要依据。HBeAg是乙型肝炎核心抗原的可溶性成分，常常与血清HBV-DNA、DNA.P及Dane颗粒同时存在，为HBV复制和具有传染性的标志，也是急性乙型肝炎发展为慢性的重要指标。

目前国内外的用于检测HBeAg的试剂都是针对1-149aa表位的抗体，对HBcAg存在一定的交叉反应，对于HBeAg的终点判断有一定的限制作用。

开发一种简单、准确的HBeAg发光检测试剂在HB患者抗病毒疗效及病程预后方面都有迫切的现实意义以及对于抗病毒药物的筛选也提供了一种评估手段。

发明内容

本发明的第一个方面提供了针对乙型肝炎病毒e抗原的单克隆抗体抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合乙型肝炎病毒e抗原的-10至-1位氨基酸表位。

优选地，所述抗体包含分别如SEQ ID NO:1-3所示的重链CDR序列CDR1-3；和SEQID NO:4-6所示的轻链CDR序列CDR1-3。

更优选地，所述抗体包含如SEQ ID NO:7所示的重链可变区序列和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区序列。

在优选的实施方式中，本发明的单克隆抗体是于2019年11月28日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国，武汉，武汉大学)的杂交瘤细胞株16D9分泌的单克隆抗体，该杂交瘤细胞株的保藏编号为C2019301。

在另一个方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区。