[发明专利]2’-岩藻糖基乳糖产量提高的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法

权利要求书

1.一种2'-岩藻糖基乳糖产量提高的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述的重组枯草芽孢杆菌是在枯草芽孢杆菌BSGL中过表达岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶与岩藻糖基转移酶的融合蛋白得到，其中，所述的枯草芽孢杆菌BSGL是通过在枯草芽孢杆菌168的基因组中强化表达乳糖运输酶基因得到；

所述的岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶与岩藻糖基转移酶之间通过linker连接；

所述的linker的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；

所述的岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因的核苷酸序列如NCBI上GenBank:AY849806.1所示；所述的岩藻糖基转移酶的核苷酸序列如NCBI上GenBank:KY499613所示。

2.根据权利要求1所述的重组芽孢杆菌，其特征在于，所述的重组枯草芽孢杆菌是以pP43-mpd为表达载体。

3.一种权利要求1~2任一项所述的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、构建包含岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶基因、岩藻糖基转移酶基因和linker基因的重组质粒；

S2、将重组质粒转化到枯草芽孢杆菌BSGL感受态中，通过验证，确认岩藻糖激酶和磷酸鸟嘌呤基转移酶、岩藻糖基转移酶融合蛋白表达成功，得到所述的重组枯草芽孢杆菌。

4.一种权利要求1~2任一项所述的重组枯草芽孢杆菌发酵生产2'-岩藻糖基乳糖的方法。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：

S1、将所述重组枯草芽孢杆菌单菌落接种在种子培养基中培养8~12h，制备成种子液；

S2、将种子液接种至发酵培养基中，于34~36℃、180~220 r/min条件下培养20~30h后，分离发酵液得到2'-岩藻糖基乳糖。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的种子培养基包括胰蛋白胨8~12 g/L、酵母粉4~6 g/L、NaCl 8~12 g/L。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养基包括：初始甘油15~25g/L、蛋白胨5~7 g/L、酵母粉10~15 g/L、(NH₄)SO₄ 5~7 g/L、K₂HPO₄·3H₂O 12~13 g/L、KH₂PO₄2~3 g/L、CaCO₃ 4~6 g/L以及微量元素8~12 ml/L；微量元素按g/L计含有：MnSO₄·5H₂O 0.8~1.2、CoCl₂·6H₂O 0.3~0.5、NaMoO₄·2H₂O 0.1~0.3、ZnSO₄·7H₂O 0.1~0.3、AlCl₃·6H₂O0.08~0.12、CuCl₂·H₂O 0.08~0.12、H₃BO₄ 0.04~0.06、4~6M HCl。