[发明专利]一种用于筛选抗噬菌体的植物乳杆菌菌株的方法

权利要求书

1.一种用于筛选抗噬菌体的植物乳杆菌菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)获取含有植物乳杆菌的样品进行发酵培养，然后破碎植物乳杆菌释放并富集噬菌体；

(2)使用双层平板法分离步骤(1)中富集的噬菌体；

(3)将植物乳杆菌接种到液体培养基中培养至对数生长期，添加步骤(2)分离的噬菌体，培养使噬菌体感染并裂解植物乳杆菌获得裂解液；

(4)将步骤(3)获得的裂解液涂布固体培养基上，培养后挑取单菌落接种至中培养，取培养液连续多次划线培养获得纯菌株，将所得菌株培养在液体培养基中，加入噬菌体培养，若在噬菌体存在下，连续传代至少三次均能正常生长，则该液体培养基菌株被确定为抗噬菌体的植物乳杆菌菌株。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)含有植物乳杆菌的样品为发酵乳样品。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)先将样品接种到MRS-Ca液体培养基培养，培养液采用超速离心方法破裂植物乳杆菌释放噬菌体，上清液过滤去除杂质；然后取滤液加入TSB液体培养基中，再加入植物乳杆菌共培养，培养液采用超速离心方法破裂植物乳杆菌释放噬菌体，上清液过滤去除杂质获得富集后的噬菌体。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，第一次上清液过滤使用0.45um的无菌微孔滤膜过滤；第二次上清液过滤使用0.22um的无菌微孔滤膜过滤。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，超速离心方法为12000g离心30min。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)双层平板法分离噬菌体时，上层培养基为0.8％的TSB半固体培养基，下层培养基为2％的TSB固体培养基，将2％的TSB固体培养基均匀倒入平板中，冷却凝固，制备底层平板，取步骤(1)中富集的噬菌体、对数期的植物乳杆菌菌液与0.8％半固体培养基混合均匀后，倒入已制备好的底层平板中，静置20min待水分蒸发后，于37℃下培养24h。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中添加噬菌体的量按感染复数0.1添加。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中使用的液体培养基为MRS-Ca液体培养基。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中使用的固体培养基为MRS固体培养基，液体培养基为MRS-Ca液体培养基。