[发明专利]一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种鉴别五种石斑鱼的方法，其特征在于，以待测样品的基因组DNA为模板，利用核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示的引物进行PCR扩增，回收PCR扩增产物后酶切，将酶切产物电泳，根据电泳结果判定待测样品的石斑鱼类型；所述五种石斑鱼为云龙杂交斑、虎龙杂交斑、红龙杂交斑、赤点石斑鱼和斜带石斑鱼；

所述SEQ ID NO:1的核苷酸序列为TCGCCTGTTTATCAAAAACATCGC，所述SEQ ID NO:2的核苷酸序列为TCCGGTCTGAACTCAGATCACGTA；

所述酶切所用的内切酶为内切酶MluC I、内切酶BsrD I和内切酶Hinf I；

所述根据电泳结果判定待测样品的石斑鱼类型的方法为：当用内切酶MluC I和BsrD I进行双酶切时，如待测样品电泳图谱显示出2条大小分别为215～225bp和175～185bp的条带，则鉴定为云龙杂交斑；如待测样品电泳图谱显示出1条大小为215～225bp的条带，则鉴定为虎龙杂交斑；如待测样品电泳图谱显示出2条大小分别为255～265bp和175～185bp的条带，则鉴定为红龙杂交斑；当用内切酶BsrD I进行酶切时，如待测样品电泳图谱显示出1条大小为645～655bp的条带，则鉴定为赤点石斑鱼；如待测样品电泳图谱显示出1条大小为435～455bp的条带，则鉴定为虎龙杂交斑；当用内切酶Hinf I进行酶切时，如待测样品电泳图谱显示出1条大小为645～655bp的条带，则鉴定为虎龙杂交斑；如待测样品电泳图谱显示出2条大小分别为295～305bp和345～355bp的条带，则鉴定为斜带石斑鱼。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系为：95～105ng模板DNA、45～55μL Premix Taq、3.5～4.5μL上游引物、3 .5～4 .5μL下游引物、去离子水补齐至100μL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：所述PCR扩增的程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，52～58℃退火30s，72℃延伸1min，共38个循环；72℃延伸5min；4℃保存。

4.一种用于鉴别五种石斑鱼的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物和权利要求1中酶切所用的内切酶；所述五种石斑鱼为云龙杂交斑、虎龙杂交斑、红龙杂交斑、赤点石斑鱼和斜带石斑鱼。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR扩增试剂。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，判定待测样品的石斑鱼类型的方法为权利要求1所述的方法。