[发明专利]一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物、试剂盒及方法。本发明首先提供了一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示；所述五种石斑鱼为云龙杂交斑、虎龙杂交斑、红龙杂交斑、赤点石斑鱼或斜带石斑鱼中的任意一种或几种。利用该引物，采用线粒体基因组DNA条形码与限制性核酸内切酶技术相结合的方法能够快速、有效的对五种石斑鱼进行鉴别，其反应稳定、重复性好；与传统的形态学鉴定相比，该方法具有检测准确性高、客观性强的特点；与单纯的线粒体基因组DNA条形码测序鉴定方法相比，该方法具有直观性强、判断简易的特点；因此，本发明提供的引物在鉴别五种石斑鱼或制备用于鉴别五种石斑鱼的试剂盒中具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域。更具体地，涉及一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物、试剂盒及方法。

背景技术

鱼类线粒体基因组DNA包括：1个主要的非编码区(D-loop)、1个轻链复制起始区(O_L)、2个核糖体RNA基因(12rRNA和16S rRNA)、22个转运RNA基因(tRNA)以及13个蛋白质编码基因。石斑鱼(Epinephelus spp.)，是石斑鱼属(Epinephelus)的总称，属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鲈形目(Perciformes)、鮨科(Serranidae)、石斑鱼亚科(Epinephelinate)。在我国沿海记录的石斑鱼种类有40多种，其主要产自南海及东海南部，由于其肉质鲜美、营养丰富、抗逆性强、生长快，已越来越受到消费者和养殖者的青睐。近年来，杂交育种作为鱼类新品种改良的有效手段得到了普遍的应用。

在石斑鱼属中，赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)和斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)在我国具有较高养殖规模和经济产量。而目前，在国内开展的杂交石斑鱼研究包括云纹石斑鱼(Epinehelus moara)(♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus Lanceolatus)(♂)的F1子代云龙杂交斑，棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)(♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus Lanceolatus)(♂)的F1子代虎龙杂交斑，赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)(♀)×鞍带石斑鱼(Epinephelus Lanceolatus)(♂)的F1子代红龙杂交斑等。由于赤点石斑鱼、斜带石斑鱼、云龙杂交斑、虎龙杂交斑和红龙杂交斑在形态学特征上有很多相似之处，尤其在鱼苗阶段，很难通过肉眼对其进行区分，这给苗种场的鱼苗筛选和管理带来很多不便。CN108588241A公开了一种鉴别棕点石斑鱼的分子特异性标记引物及方法，但是该引物仅适用于鉴别棕点石斑鱼，而不适用于棕点石斑鱼与其他石斑鱼的杂交F1子代、以及其他石斑鱼的分子鉴定。因此，研发一种能够同时快速、有效的鉴别多种石斑鱼的方法，对于水产养殖中的鱼种鉴定具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有上述现有技术的缺陷和不足，提供一种用于五种石斑鱼(云龙杂交斑、虎龙杂交斑、红龙杂交斑、赤点石斑鱼和斜带石斑鱼)的分子鉴别引物、试剂盒及方法。

本发明的目的是提供一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物。

本发明另一目的是提供所述引物在鉴别五种石斑鱼或制备用于鉴别五种石斑鱼的试剂盒中的应用。

本发明另一目的是提供所述引物在制备用于鉴别五种石斑鱼的试剂盒中的应用。

本发明又一目的是提供一种鉴别五种石斑鱼的方法。

本发明再一目的是提供一种用于鉴别五种石斑鱼的试剂盒。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首先提供了一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示；所述五种石斑鱼为云龙杂交斑、虎龙杂交斑、红龙杂交斑、赤点石斑鱼或斜带石斑鱼中的任意一种或几种。