[发明专利]一种猪伪狂犬病病毒致弱方法、及其致弱的病毒株、疫苗组合物和应用

说明书

本发明提供了一种猪伪狂犬病病毒的致弱方法，该方法能够对猪伪狂犬病病毒进行有效地、可重现性地致弱，经该方法致弱的猪伪狂犬病病毒弱毒株，能够对猪只提供有效免疫。

本申请为专利申请201510124250.0的分案申请，原案发明名称为“一种猪伪狂犬病病毒致弱方法、及其致弱的病毒株、疫苗组合物和应用”，原案申请日为2015年3月20日。

技术领域

本发明涉及一种猪伪狂犬病病毒致弱方法、致弱的病毒株及利用该病毒株制备的疫苗组合物，属于兽用生物制品领域。

背景技术

伪狂犬病，又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科(Herpesviridae)α亚科中的猪疱疹病毒Ⅰ型(Suid herpesvirus 1strain)所引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽和野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主症的急性传染病。猪的伪狂犬病在我国广泛存在，危害严重，是制约规模化猪场生产的主要疫病之一。它能引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎和仔猪出现神经症状、麻痹，死亡率高。PRV具有较强的泛嗜性、神经嗜性及潜伏感染特性，在外周神经系统可以长期潜伏感染，当潜伏病毒被激活变成有感染力的病毒，被潜伏感染的宿主就会发病。

最近的研究报道称猪伪狂犬病发生了新的特点，突出表现为任何年龄的猪都会感染，可在猪群水平传播，潜伏期短(1～2天)，发病率在10％～100％之间，发病猪死亡率在10％～100％之间(仔猪死亡率可高达100％)，感染后可引起猪只高热(40～42℃，持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死，并可引起种公猪精液质量下降，怀孕母猪流产(高达35％)，早产，死胎，弱仔(弱仔14日龄前全部死亡)等繁殖障碍症状。现有技术的疫苗免疫猪只后不能完全抵抗野毒攻击，依然会出现高热，精神沉郁，食欲下降或废绝等症状，感染率超过80％，发病率超过30％，死亡率在10％～20％之间(参见猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析.彭金美等.中国预防兽医学报，2013，35(1)：1-4；免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定.童武等.中国动物传染病学报，2013,21(3):1-7；PathogenicPseudorabies Virus,China,2012.Yu et al.,Emerging infectious Diseases.2014,20(1):102-104；Pseudorabies virus variant in Bartha-K61-vaccinated pigs,China,Anet al.,Emerging infectious Diseases.2013.19(11)：1749-1755，现有技术还没有疫苗能够解决针对猪伪狂犬变异株引起的伪狂犬病。

预防和控制猪伪狂犬变异株引起的伪狂犬病有效的方法是疫苗接种，开发商品化的疫苗可以是灭活疫苗，也可以是弱毒株制备的活疫苗。然而，灭活疫苗成本较高，活疫苗一般是通过基因工程手段人工缺失毒力基因致弱毒株来制备的，存在生物安全风险。

发明内容

为解决上述问题，本发明通过细胞传代方式，自然致弱毒株，使其完全在自然进化过程中发生变异，达到完全适应自然环境条件，以保证该致弱毒株的稳定性，不存在生物安全方面的风险。

本发明的第一方面在于一种猪伪狂犬病病毒的致弱方法，所述方法包括：(1)所述猪伪狂犬病病毒的适应培养步骤，将猪伪狂犬病病毒接种到哺乳动物传代细胞中，进行传代培养至所述猪伪狂犬病病毒传代5代以上，得到猪伪狂犬病病毒哺乳动物传代细胞适应株；以及(2)所述猪伪狂犬病病毒的致弱步骤，将所述步骤(1)的所述猪伪狂犬病病毒哺乳动物传代细胞适应株接种到禽源传代细胞中，进行传代培养至所述猪伪狂犬病病毒传代1代以上，得到所述的猪伪狂犬病病毒弱毒株。