[发明专利]一种包含特异性结合AFP蛋白的抗体的疾病检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种包含特异性结合AFP蛋白的抗体的疾病检测试剂盒，其包含能够和AFP特异性结合且不与HAS交叉反应的抗体，所述试剂盒拥有更高的灵敏度，用于AFP异常的肝癌、胎儿先天性疾病的早期筛查诊断、疗效检测和预后判断。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体的涉及一种包含特异性结合AFP蛋白的抗体的疾病检测试剂盒。

背景技术

原发性肝癌是预后极差的恶性肿瘤之一，目前我国肝癌已处于恶性肿瘤病死率的第2位。尽管目前肝癌能够早期发现，且治疗方法较多，但治疗效果仍不能令人满意，大部分肝癌患者对化学药物治疗和放射治疗等均无显著效果，能手术根治的患者仅占15％。甲胎蛋白(alpha—fetoprotein，AFP)是一种重要的肿瘤相关抗原。目前AFP是原发性肝癌诊断和生物治疗的一种重要的靶抗原。AFP是胎儿特异性蛋白，主要在胎儿卵黄囊和肝脏合成，是单链多肽，属于α球蛋白，分子量约为64—72KD，其肽链氨基酸序列与白蛋白相似，其蛋白部分由590个氨基酸组成。血清AFP大于400ng／mL是诊断原发性肝癌的重要辅助指标。研究表明，AFP具有较强的单独促进肝癌细胞增殖作用，并且AFP在肝癌时的高表达，可能是重要的内源性促肿痛细胞增殖的自分泌现象。AFP的检测已成为原发性肝癌诊断和预后监测的重要指标，也成为公认的肝癌生物治疗的靶抗原。除了原发性肝癌，某些胃癌、恶性畸胎瘤、胰腺腺泡细胞癌、结肠癌及肾细胞癌患者均发现血清中AFP水平显著增高。此外，AFP 在胎儿血液循环中浓度较高，出生后 2～3 月 AFP 含量较少，血液中较难检出。若胎儿先天性脊柱裂、神经管缺陷以及唐氏综合征等会导致甲胎蛋白含量的变化，妊娠期可通过 AFP 监测进行上述疾病的筛查和诊断。因此AFP的检测，有助于AFP异常的肝癌、胎儿先天性疾病的诊断与提前干预、治疗。

现有技术中也有一些专利中公开了AFP抗体，例如：CN105037546A、CN10331959B、CN105037544A，但经过发明人研究后发现，这些抗体在灵敏度上还有待提高。同时由于人AFP与人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA）具有50％同源性，以AFP为抗原免疫后制备的单克隆抗体与人血清白蛋白存在较高的交叉反应几率。

发明内容

基于上述发现，本发明的首要目的在于提供一种新的AFP抗体，具有更高的灵敏度同时不与HSA反应，以解决现有AFP抗体灵敏度低且有可能与HSA发生非特异性结合的问题。

本发明提供以下技术方案：

一种抗AFP抗体，命名为hAFP-2，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区为SEQ ID NO :1，轻链可变区为SEQ ID NO :2 。

一种抗AFP抗体，命名为hAFP-6，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区为SEQ ID NO : 9，轻链可变区为SEQ ID NO : 10 。

hAFP-2重轻链可变区共有6个互补决定区。所述抗体1的重链可变区3个CDR序列分别为SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5；轻链可变区3个CDR序列分别为SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8。

所述hAFP-6的重链可变区3个CDR序列分别为SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQID NO:13；轻链可变区3个CDR序列分别为SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16。

本发明所述AFP抗体的重链和轻链进一步包含恒定区，所述抗体轻链恒定区进一步包含鼠源κ、λ链序列。所述抗体重链恒定区进一步包含鼠源IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3或IgA或IgM序列。

本发明的目的在于提供两种新的AFP抗体，所述抗体均不与HSA交叉反应且识别不同的AFP表位，用于检测样本中AFP蛋白存在及含量的抗体。