[发明专利]一种纳米硒的制备方法

权利要求书

1.一种纳米硒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

从LB固体培养基上挑选枯草芽孢杆菌的单菌落至LB液体培养基中，培养获得枯草芽孢杆菌活化液，其中，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌168菌株；

将所述枯草芽孢杆菌活化液接种到含有亚硒酸钠的LB液体培养基中进行发酵培养，得到发酵培养液；

离心收集所述发酵培养液中的沉淀物，并使用氯化钠溶液对所述沉淀物进行重悬，得到重悬液；

配制不同浓度的蔗糖储存液，并将所述蔗糖储存液按照浓度从高到低的顺序依次加入到离心管内，添加完毕后在3~5℃下静置10~14h，得到形成有蔗糖浓度梯度的离心管；

将所述重悬液加入到所述形成有蔗糖浓度梯度的离心管中，离心并收集沉淀，制得纳米硒；

其中，所述含有亚硒酸钠的LB液体培养基中还含有丁硫氨酸亚砜亚胺，所述丁硫氨酸亚砜亚胺的浓度为0.01~0.5mol/L；

所述含有亚硒酸钠的LB液体培养基中，亚硒酸钠的浓度为1~5mmol/L；

所述枯草芽孢杆菌活化液的体积为所述含有亚硒酸钠的LB液体培养基体积的1~3%。

2.如权利要求1所述的纳米硒的制备方法，其特征在于，将所述枯草芽孢杆菌活化液接种到含有亚硒酸钠的LB液体培养基中进行发酵培养，得到发酵培养液的步骤中：

所述发酵培养时的培养转速为150~200r/min，培养温度为30~37℃，培养时间为36~72h。

3.如权利要求1所述的纳米硒的制备方法，其特征在于，离心收集所述发酵培养液中的沉淀物，并使用氯化钠溶液对所述沉淀物进行重悬，得到重悬液的步骤中：

所述离心时的离心力为6500~7500g，离心时间为25~35min。

4.如权利要求1所述的纳米硒的制备方法，其特征在于，离心收集所述发酵培养液中的沉淀物，并使用氯化钠溶液对所述沉淀物进行重悬，得到重悬液的步骤中：

每50mL的发酵培养液离心后所得到的所述沉淀物，对应使用2~3mL的氯化钠溶液进行重悬，所述氯化钠溶液的质量浓度为0.9%。

5.如权利要求1所述的纳米硒的制备方法，其特征在于，配制不同浓度的蔗糖储存液，并将所述蔗糖储存液按照浓度从高到低的顺序依次加入到离心管内，添加完毕后在3~5℃下静置10~14h，得到形成有蔗糖浓度梯度的离心管的步骤，包括：

按照每100mL水中对应加入10g、20g、30g、40g、50g、60g蔗糖的比例，分别配制得到不同浓度的蔗糖储存液；

将所述蔗糖储存液按照等体积的添加量、且浓度从高到低的顺序依次加入到离心管中，添加完毕后将离心管在3~5℃下静置10~14h，得到形成有蔗糖浓度梯度的离心管。

6.如权利要求1所述的纳米硒的制备方法，其特征在于，将所述重悬液加入到所述形成有蔗糖浓度梯度的离心管中，离心并收集沉淀，制得纳米硒的步骤中：

所述离心时的离心力为10000~12000g，离心时间为25~35min。