[发明专利]一种用于2019-nCoV检测的核酸组合物及其试剂盒与生产方法

权利要求书

1.一种用于2019-nCoV检测的核酸组合物，所述核酸组合物包括正向引物、反向引物和探针，其特征在于，所述正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示；

所述探针的序列如SEQ ID NO.3所示；

所述正向引物序列、反向引物序列及探针序列用于扩增ORF3基因SEQ ID NO.4上的目标基因SEQ ID NO.5；

所述探针的5’端采用荧光报告基团修饰，所述探针的3’端采用荧光淬灭基团修饰。

2.一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的正向引物、反向引物和探针，且所述正向引物、反向引物和探针独立包装，还包括酶混合物和PCRMIX。

3.根据权利要求2所述的一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其特征在于，所述正向引物、反向引物及探针为液态，所述酶混合物和PCR MIX为液态，所述PCR MIX中包含有PCR缓冲液、阳离子及dNTPs。

4.根据权利要求2所述的一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其特征在于，所述正向引物、反向引物和探针为液态，所述酶混合物和所述PCR MIX均为液态，检测试剂盒内还包括液态的冻干保护剂，液态的核酸组合物、液态的酶混合物、液态的PCR MIX及液态的冻干保护剂混合后冻干形成冻干粉反应试剂置于检测试剂盒内。

5.根据权利要求3或4所述的一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其特征在于，所述酶混合物中包含有RNA酶抑制剂。

6.根据权利要求3或4所述的一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其特征在于，检测试剂盒内还包括阳性对照品，所述阳性对照品为含有目标基因序列的假病毒。

7.根据权利要求3或4所述的一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其特征在于，所述酶混合物还包括DNA聚合酶和逆转录酶，所述DNA聚合酶选用热启动Taq酶，所述逆转录酶选自c-MMLV逆转录酶或AMV逆转录酶中的一种。

8.根据权利要求3所述的一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液选用Tris-HCl，所述Tris-HCl的pH=8.3。

9.根据权利要求3所述的一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其特征在于，所述阳离子包括K⁺和Mg²⁺，所述正向引物和反向引物在PCR扩增反应体系中的终浓度为50～250nmol/mL；所述探针在PCR扩增反应体系中的终浓度为50～200nmol/mL；所述酶混合物中各组分在PCR扩增反应体系中的终浓度为10⁵U/L 热启动Taq酶、4×10⁶U/L 逆转录酶、8×10⁵ U/L RNA酶抑制剂；所述PCR MIX各组分在PCR扩增反应体系中的终浓度为50 mM Tris-HCl、50 mM K⁺、3.5 mM Mg²⁺、0.2mM dNTPs 。

10.如权利要求4所述的一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，

S1：混合

将液态的终浓度为50～250nmol/mL的所述正向引物和反向引物、终浓度为50～200nmol/mL的所述探针及液态的酶混合物、PCR MIX以及液态的终浓度为0.2M的冻干保护剂混匀，获得反应混合液；

S2：冻干

将S1中的反应混合液冻干，获得所述冻干粉反应试剂，所述冻干程序为：

预冷冻，温度-15℃，预冷冻时间1.5小时；

升华，温度-4℃，升华时间 0.5小时；

解析干燥，温度10℃，解析干燥时间0.5小时：

加强干燥，温度25℃，加强干燥时间0.5小时。