[发明专利]一种用于2019-nCoV检测的核酸组合物及其试剂盒与生产方法

说明书

本发明公开了一种用于2019‑nCoV检测的核酸组合物及其试剂盒与生产方法，涉及病毒体外核酸检测技术领域。用于2019‑nCoV检测的核酸组合物为正向引物、反向引物及探针；用于2019‑nCoV检测的检测试剂盒中包含该核酸组合物，还包括酶混合物和PCR MIX，该检测试剂盒可制备成液态，也可制备成粉态；本发明中粉态的检测试剂盒的生产方法包括混合和冻干步骤。本发明中的核酸组合物及试剂盒可对2019‑nCoV基因序列上的ORF3中的目标基因进行特异性扩增，且检测灵敏度高，还能够对病毒的初始拷贝数进行准确定量，可广泛用于2019‑nCoV核酸检测。

技术领域

本发明涉及病毒体外核酸检测技术领域，更具体地说，它涉及一种用于2019-nCoV检测的核酸组合物及其试剂盒与生产方法。

背景技术

2019年12月以来，陆续发现了多例不明原因肺炎病例，现已证实为一种新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病。此次疫情传染性强，临床上以发热、乏力、干咳为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状，部分患者仅表现为低热、轻微乏力等，无肺炎表现，病情危重者可导致死亡。2020年1月12日，世界卫生组织将引起本次病毒性肺炎病例的病原体命名为2019-nCoV，即2019新型冠状病毒。

2019-nCoV属于β属的新型冠状病毒，为RNA病毒，其有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm，是目前已知的可以感染人的第7种冠状病毒，其余6种冠状病毒分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。其中前4种在人群中较为常见，致病性较低，一般仅引起类似普通感冒的轻微呼吸道症状，另外2种是致病性较高的SARS冠状病毒和MERS冠状病毒。核酸检测是临床病原学诊断的常用方法，其具有灵敏高、特异性强等优点。新型冠状病毒肺炎疫情发生以来，核酸检测是临床诊断、解除隔离、康复出院的重要诊断依据。基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR技术具有简单、快速、准确的优势，已广泛应用于临床病原体的检测，曾在2003年爆发的SRAS病毒的疫情控制方面做出过重要贡献，是WHO推荐的MERS-CoV病毒检测方法之一，目前，实时荧光RT-PCR技术已被列入我国2019-nCoV诊疗指南。

为了助力2019-nCoV引起的肺炎疫情的检疫和防控工作，自疫情发生以来，国内外陆续涌现出了2019-nCoV核酸检测试剂盒，如公开号为CN110982945A 的中国专利中公开的一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物、试剂盒以及方法，公开号为CN111074008A的中国专利中公开的一种可提高准确率的COVID-19新型冠状病毒核酸检测方法等。

但是，从目前临床实际使用情况来看，现有的核酸检测试剂盒仍然存在假阴性的情况，会造成漏检，给疫情防控带来很大的隐患。其假阴性的原因可能是实时荧光定量检测病毒时，由于使用的引物或探针的特异性不高，导致了无法特异性地扩增出目标基因，因此无法检测出样本中的病毒信号。鉴于此，目前本领域的技术人员仍需继续研发特异性高的核酸检测方案，以改善现有的核酸检测试剂盒存在的假阴性问题。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的第一个目的在于提供一种用于2019-nCoV检测的核酸组合物，其引物和探针易于特异性地扩增出样本中的目标基因，对样本具有准确的2019-nCoV病毒检测能力。

本发明的第二个目的在于提供一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，其能够特异、灵敏地检测出样本中的2019-nCoV病毒，且试剂盒使用起来操作简单、操作步骤少、失误率低，检测效率高。

本发明的第三个目的在于提供一种用于2019-nCoV检测的检测试剂盒生产方法，其选择冻干法生产用于2019-nCoV检测的检测试剂盒，使得本发明中的检测试剂盒具有即用即溶解、使用方便、不易降解、便于长途运输的优势。