[发明专利]一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法

权利要求书

1.一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于主要包括如下步骤：

（1）清洗：将新鲜鲍鱼用自来水清洗干净，再用天然矿泉水或纯化水洗净沥干待用；

（2）匀浆：将步骤(1)所得鲍鱼加入高速匀浆机，加入天然矿泉水或纯化水，进行高速匀浆，直至全部能够通过2mm孔径圆筛；

（3）灭菌：将匀浆后的鲍鱼通过高压蒸锅灭菌，冷却后待用；

（4）复合酶解：向灭菌后的浆液中加入质量比2%的复合酶制剂，在40～60℃条件下搅拌酶解30min；

（5）好氧发酵：向酶解后的酶解液中加入酶解液质量比3%的复合微生物菌剂，在28～35℃条件下好氧发酵8h；

（6）厌氧发酵：好氧发酵结束后加入2%的两岐双歧杆菌粉，在28～35℃条件下厌氧发酵12h；

（7）过滤：进行粗过滤除去发酵菌体；

（8）灭酶：在100℃条件下灭酶10min；

（9）离心：以10000r/min速率离心分离，去除不溶性成分；

（10）乙醇沉淀：向离心液中加入乙醇，静置60min以上；

（11）离心浓缩：离心除去沉淀物，减压浓缩得到鲍灵素提取液。

2.根据权利要求1所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述步骤（4）中复合酶制剂为蛋白酶、非淀粉多糖酶和果胶酶的中的一种或几种的混合物。

3.根据权利要求2所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述蛋白酶、非淀粉多糖酶和果胶酶的质量比为2:1:2。

4.根据权利要求1所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述步骤（4）酶解液中加入酶解液质量比2～5%的葡聚糖。

5.根据权利要求1所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述步骤（5）中所述复合微生物菌剂为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和冷解糖芽孢杆菌的混合菌剂，其质量比组成为3:2:2。

6.根据权利要求1所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述步骤（10）乙醇沉淀时应使其中的乙醇浓度为30～40%。

7.根据权利要求1所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述步骤（5）中好氧发酵过程在发酵罐中进行时通风量为0.2～0.3m³/m³.min。

8.根据权利要求4所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和冷解糖芽孢杆菌种子液制备方法为：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，制得液体枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和冷解糖芽孢杆菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥10⁹cfu/mL。

9.根据权利要求1所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述鲍灵素提取液可以通过树脂吸附提取制备鲍灵素干制品，具体工艺步骤为：将鲍灵素提取液以2～3倍柱体积/h的流速通过大孔吸附树脂柱，而后用水以同样的流速洗脱，接着用乙醇洗脱被吸附在大孔吸附树脂上的鲍灵素成分并收集洗脱液减压浓缩至浸膏状，最后冷冻干燥为鲍灵素干品。

10.根据权利要求9所述的一种提高鲍灵素提取液抗癌免疫增强功效的方法，其特征在于所述洗脱用的乙醇浓度为60～70%，减压浓缩中的温度控制在40～50℃。