[发明专利]一种叠氮功能化二氧化硅均孔膜用于细胞中H2

说明书

本发明涉及一种叠氮功能化二氧化硅均孔膜用于细胞中H₂S的电化学检测方法。首先通过水热合成法制备叠氮基团共价枝接的二氧化硅均孔膜修饰电极；基于H2S对叠氮基团的特异性还原作用，二氧化硅均孔膜中的叠氮基团被还原为氨基基团，从而改变了二氧化硅均孔膜孔道的表面电荷，促进铁氰化钾负电荷探针在孔道中的富集，增加其电化学信号；基于铁氰化钾的电化学信号绘制工作曲线；通过试剂刺激癌细胞释放H₂S，利用该方法即可实现对细胞内H₂S的测定。

技术领域

本发明涉及肿瘤细胞中H₂S的检测方法，具体的说一种叠氮功能化二氧化硅均孔膜制备用于电化学检测H₂S。

背景技术

在作为细胞内最小的含硫物种，硫化氢（H₂S）被认为是继一氧化碳（CO）和一氧化氮（NO）之后的第三种内源性气体信号分子，在维持正常的生命体活动中起着非常重要的作用。生理水平的H₂S参与多种生命调节过程，包括神经调节、血管舒张、细胞生长和凋亡、炎症控制、胰岛素分泌和抗氧化等。然而，一旦H₂S的浓度失衡，则会引发包括阿尔兹海默症、糖尿病、唐氏综合症和肝硬化等多种疾病。因此，H₂S在人体健康或疾病过程中起着非常重要的作用，准确测量细胞内H₂S的含量对于研究其生理学功能和相关疾病的早期诊断具有重要的意义。

目前H₂S检测分析方法主要有：气相色谱法、荧光光谱法、电化学发光法等。荧光法是最常用的检测细胞中H₂S的方法，由于一般荧光成像分析易受荧光漂白、自体荧光干扰和环境的影响，而细胞内环境复杂，检测容易受到干扰。气相色谱法法一般用于检测环境中游离的H₂S，细胞内分子繁多，检测易受干扰，导致准确性和灵敏度较低。化学发光检测的选择性较差，面对复杂的样品，通常需要与分离技术联用，以达到理想效果。因此，建立一种高特异性和灵敏度的快速检测细胞内H₂S的方法，成为该领域亟需解决的问题之一。

二氧化硅均孔膜，是具有高比表面积、高的孔隙率、孔径尺寸均一且孔道阵列垂直的一种薄膜。二氧化硅均孔膜独特的结构特征使其具有限域效应、电荷选择性以及表面抗污能力，从而赋予了该膜在电化学分析和分子分离方面的能力，使其在复杂生物体系中的分析检测领域有良好的应用前景。将对H₂S具有特异作用的叠氮分子修饰在二氧化硅均孔膜中，基于H₂S对叠氮分子的还原作用改变二氧化硅均孔膜的表面性质，通过对表面性质敏感的电化学探针的电化学信号的变化来定量指示细胞中H2S的含量。

发明内容

本发明的目的在于建立一种叠氮二氧化硅均孔膜用于H₂S的电化学检测方法。

所述的一种叠氮二氧化硅均孔膜用于H₂S的电化学检测方法过程如下：

（1）制备孔道内壁共价接枝叠氮基团的二氧化硅均孔膜修饰的工作电极；

（2）将制备的电极浸入不同浓度的NaSH标准溶液中反应一定时间；

（3）将S^2-标准液处理的电极清洗干净，测试其在铁氰化钾探针中的电化学信号，根据不同浓度NaSH标准溶液处理后铁氰化钾探针的电化学信号构建标准曲线；

（4）将制备的电极浸入到含一定数量癌细胞的溶液中，加入刺激物，引发细胞释放H₂S，反应一段时间，冲洗电极，测量处理过电极在铁氰化钾探针中的电化学信号，实现癌细胞中H₂S的检测。

所述的一种叠氮二氧化硅均孔膜用于检测细胞内H₂S的电化学检测方法具体步骤如下：