[发明专利]一种羊肚菌源抗氧化肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种羊肚菌源抗氧化肽，其特征在于，所述抗氧化肽的序列为：Ala-Tyr-Asp-Gln-Ile-Asp-Ala-Ala-Pro-Glu-Glu-Lys。

2.如权利要求1所述的羊肚菌源抗氧化肽，其特征在于，该抗氧化肽由12个氨基酸组成，相对分子质量为1348 Da。

3.如权利要求1所述的羊肚菌源抗氧化肽在制备抗缺血缺氧性脑损伤药物中的应用。

4.如权利要求1所述的羊肚菌源抗氧化肽在制备抗缺血缺氧性脑损伤保健品中的应用。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的药物是以有效量的羊肚菌源抗氧化肽为活性成分，加上医学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，以体重计，羊肚菌源抗氧化肽的使用剂量为0.5-0.7 mg/kg。

7.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的保健品是以有效量的羊肚菌源抗氧化肽为活性成分，加上保健品中可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的保健品。

8.如权利要求4所述的应用，其特征在于，抗氧化肽的添加量为1–2 mg/天。

9.一种如权利要求1所述羊肚菌源抗氧化肽的合成方法，其特征在于包括以下步骤：

1）称量2-CL树脂2 g，放入反应器中，用DCM浸泡10 min后用DMF洗涤2次，再用DCM洗涤一次，备用；

2）从C端开始，称量第一个氨基酸，2 g*0.3 mmol/g*1.33=0.798 mmol，用5 mL DCM溶解，加入0.5 mL DIEA，摇匀后加入装有树脂的反应器中，摇晃或氮气鼓泡反应90 min，反应过程中DCM挥发，需要补加DCM；

3）反应结束后，补加分析级甲醇2 mL，4mL DCM，封闭反应20 min后，DMF洗涤树脂3次；

4）脱FMOC，20%哌啶+80%DMF，脱保护20 min后用DMF洗涤5次，每次30 s，取少量树脂加入两滴茚三酮100 ℃检测显色，茚三酮的配比为2.5 g茚三酮/50 mL无水乙醇；

5）称量下一个氨基酸Fmoc-aa-oh ，2 g*0.3 mmol/g*3=1.8 mmol，1.8 mmol HOBT，用5mL DMF溶解加入0.5 mL DIC，活化1 min加入反应器中反应1 h，反应结束DMF洗涤树脂4次后取少量树脂茚三酮检测无色即可，若有颜色需要重复投料；

6）重复步骤4）和5），依次反应剩下的氨基酸，缩合完最后一个氨基酸，脱除FMOC，洗涤完成后，再用甲醇洗涤3次抽干准备切割；

7）多肽的切割：

切割液：95 mL TFA+1 mL水+2.5 mL TIS+2.5 EDT；

将树脂肽称重，放入50 mL离心管切割 (1 g树脂肽: 10 mL切割液) 室温裂解2 h；

将切割液过滤得到还有多肽的滤液，加入冰乙醚 (-20℃) (滤液: 乙醚=1:8) 析出多肽离心得到粗品肽；

8）粗品肽通过HPLC液相纯化得到纯品，冻干成为粉末。

10.如权利要求1所述的羊肚菌源抗氧化肽，其特征在于：羊肚菌源抗氧化肽具有较好的自由基清除活性，对DPPH自由基清除活性的IC50值为0.83 mg/mL，且具有剂量依赖关系，对羟自由基的清除能力的IC50值为2.64 mg/mL，对超氧阴离子自由基的清除能力的IC50值为3.05 mg/mL。