[发明专利]基于高效液相色谱的低糖型强力枇杷露的指纹图谱检测方法

权利要求书

1.一种基于高效液相色谱的低糖型强力枇杷露的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述指纹图谱检测方法包括以下步骤：

取绿原酸配制对照品溶液，所述对照品溶液的配制方法为：取绿原酸对照品，用15％的甲醇制成浓度为0.020mg/ml的溶液，即得对照品溶液；

取低糖型强力枇杷露配制供试品溶液，供试品溶液的配制方法为：取低糖型强力枇杷露，用乙酸乙酯溶液每次15ml萃取3次，取萃取液放置于处理好的C18固相萃取柱上，加水洗脱，再用浓度为15％的甲醇洗脱，收集水洗脱液和甲醇洗脱液，合并，蒸干，残渣加浓度为15％的甲醇溶液，定量转移至5ml容量瓶中，用浓度为15％的甲醇定容，摇匀、滤过，取续滤液，即得；

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录2分钟-30分钟的色谱峰，即得；

其中，色谱条件包括：以甲醇和0.02mol/L磷酸氢二钾溶液为流动相分别将所述对照品溶液和供试品溶液过Agilent Eclipse Pluc C18色谱柱并进行梯度洗脱，并且在所述梯度洗脱的过程中控制所述甲醇的体积，使得所述甲醇的体积占所述流动相总量的百分比按照以下比例增加；

在梯度洗脱所述对照品溶液和所述供试品溶液时：

t＝0min-5min时，所述甲醇占所述流动相总体积的百分比为9％，所述0.02mol/L磷酸氢二钾溶液占所述流动相总体积的百分比为91％；

t＝5min-19min时，所述甲醇占所述流动相总体积的百分比为10％，所述0.02mol/L磷酸氢二钾溶液占所述流动相总体积的百分比为90％；

t＝19min-24min时，所述甲醇占所述流动相总体积的百分比为15％，所述0.02mol/L磷酸氢二钾溶液占所述流动相总体积的百分比为85％；

t＝24min-30min时，所述甲醇占所述流动相总体积的百分比为20％，所述0.02mol/L磷酸氢二钾溶液占所述流动相总体积的百分比为80％；

所述高效液相色谱的色谱柱的柱温为35℃，流速为0.8ml/min，检测波长为254nm；所述低糖型强力枇杷露包括枇杷叶、罂粟壳、百部、白前、桑白皮、桔梗和薄荷脑，所述低糖型强力枇杷露的制法如下：中药组合物除薄荷脑外，其余六味加水煎煮两次，加水量为以上六味中药总重量的8倍，每次2小时，合并煎液，滤过，浓缩，干燥，放入用于承载中药组合物的低糖型掩味载药系统，加热至沸，保持20分钟，静置滤过，加入薄荷脑，搅拌均匀，静置，滤过，混匀，即得低糖型强力枇杷露；

所述用于承载中药组合物的低糖型掩味载药系统主要由蔗糖、纳豆菌提取液、米提取液和水组成，各成分在水中的浓度为：蔗糖8-10g/ml、纳豆菌提取液4％-6％、米提取液2％-3％，所述中药组合物与所述低糖型掩味载药系统的质量比为15-20:80-120，所述纳豆菌提取液的制备方法如下：将纳豆菌活化后接种于液体培养基上，培养后，将菌悬液分离，收集上清液，过滤除菌，母液冻干即得纳豆菌提取物；

米提取液是将大米和紫米进行发酵制得，发酵方法如下：

取质量比为4-6:15-20的大米和紫米混合均匀，粉碎至过80-200目筛，加入清水搅拌均匀，清水的质量为大米和紫米质量的和的12-15倍，再加入β-淀粉酶搅拌均匀，每克大米和紫米的混合物添加18-20个单位的β-淀粉酶，调节pH为5-5.5，在温度为95-98℃条件下保持1-1.5h，再调节pH为3.5-4，在温度为80-85℃条件下保持2-3h，再加入淀粉葡萄糖苷酶，每克大米和紫米的混合物添加50-70个单位的淀粉葡萄糖苷酶，调节温度至60-70℃，pH不变，保持6-8h，取出，在90-92℃条件下灭菌15-20min，冷却至室温，接种松乳菇菌，在温度为25-30℃、转速为80-90r/min条件下培养50-70h制得发酵液，将发酵液经菌丝体胶体磨磨浆得营养浆液，过滤、冻干，即得米提取液。

2.如权利要求1所述的基于高效液相色谱的低糖型强力枇杷露的指纹图谱检测方法，其特征在于，用所述指纹图谱检测方法检测的低糖型强力枇杷露的相似度在0.90以上。

3.一种低糖型强力枇杷露的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

按照权利要求1-2任一项所述的基于高效液相色谱的低糖型强力枇杷露的指纹图谱检测方法建立低糖型强力枇杷露的标准图谱；

将待检测的低糖型强力枇杷露样品按照所述基于高效液相色谱的低糖型强力枇杷露的指纹图谱检测方法进行检测，获得高效液相图谱，以建立待检测低糖型强力枇杷露样品的指纹图谱；

将低糖型强力枇杷露样品的指纹图谱与标准图谱进行对比，通过图谱中的色谱峰参数来评价或控制低糖型强力枇杷露的质量。