[发明专利]一种提取核酸的方法

说明书

本发明提供了一种核酸提取的方法，包括以下步骤：1)将含有核酸的混合物与第一溶液混合，水浴至完全溶解，得到第一核酸溶液；2)向步骤1)中得到的所述第一核酸溶液中加入第二溶液混合均匀后，进行第一次离心获得第一沉淀；3)向步骤2)中得到的所述沉淀中加入第三溶液洗涤，进行第二次离心获得第二沉淀，随后采用质量分数70％的乙醇水溶液洗涤，进行第三次离心，获得核酸并保存。由于本发明所描述的二价金属离子或阳离子与核酸的亲和力以及沉淀反应专一特异且不受其他核酸提取回收过程所常见的杂质的影响，所以在核酸提取纯化技术方面，例如各种基因组提取、从电泳凝胶中回收核酸、去除核酸溶液中的内毒素等等，具有广泛的用途。

技术领域

本发明属于核酸提取技术领域，具体涉及一种提取核酸的方法。

背景技术

核酸的提取，例如回收、浓缩等，是分子生物学研究与应用中不可缺少的技术。目前已知的核酸回收、浓缩技术包括乙醇、异丙醇、聚乙二醇沉淀技术，以及各种带有氧化硅、离子交换剂的薄膜、层析柱、磁珠等核酸亲和基质。这些应用广泛、已经成为分子生物学常规操作的技术，却依然受到各种限制。例如，醇类沉淀技术往往同时沉淀核酸之外的其他杂质，包括蛋白、多糖、多酚、腐殖质等，亲和基质也往往同时结合结合这些杂质，影响纯化结果。又如，某些需要高盐溶液的核酸提取技术根本无法适用离子交换剂，而醇类沉淀也会导致大量盐的析出。

发明内容

本发明目能弥补现有技术以上缺陷，提供一种核酸提取的方法，此方法利用与核酸具有亲合力的镁、钙、锰等二价或多价金属离子或阳离子能与一些化学品溶液反应形成沉淀产物，又能与另一些化学品溶液形成可溶产物的原理，将核酸从溶液中沉淀，再将离心回收的沉淀溶解后释放出核酸，从而达到回收、浓缩核酸的目的。由于本发明所描述的二价金属离子或阳离子与核酸的亲和力以及沉淀反应专一特异且不受其他核酸提取回收过程所常见的杂质(包括蛋白、多糖、多酚、腐殖质等)的影响，所以在核酸提取纯化技术方面，例如各种基因组提取、从电泳凝胶中回收核酸、去除核酸溶液中的内毒素等等，具有广泛的用途。

为了实现上述目的，本发明提供了一种核酸提取的方法，包括以下步骤：

1)将含有核酸的混合物与第一溶液混合，水浴至完全溶解，得到第一核酸溶液；

2)向步骤1)中得到的所述第一核酸溶液中加入第二溶液混合均匀后，进行第一次离心获得第一沉淀；

3)向步骤2)中得到的所述第一沉淀中加入第三溶液洗涤，进行第二次离心获得第二沉淀，随后采用质量分数70％的乙醇水溶液洗涤，进行第三次离心，获得核酸并保存；

其中所述第一溶液为二价金属化合物与硫酸氰胍形成的水溶液；所述第二溶液为一价金属化合物与三羟甲基氨基甲烷形成的水溶液；所述第三溶液为一价金属化合物和柠檬酸形成的水溶液。

其中所述第一溶液为二价金属化合物与硫酸氰胍形成的水溶液，其中所述二价金属化合物的质量浓度为10-30g/L,所述硫酸氰胍的质量浓度为200-600g/L。所述二价金属化合物为氯化镁、硫酸镁、醋酸镁、氯化钙、氯化锰中的一种。优选的，所述第一溶液为硫酸镁和硫酸氰胍形成的溶液，其中所述硫酸镁的质量浓度为24g/L所述硫酸氰胍的质量浓度为550g/L。出于使用方便和使用安全的考虑，这些二价金属离子的形式优先考虑无毒、便宜又不会伤害核酸的化合物，例如但不限于：氯化镁、硫酸镁、醋酸镁、氯化钙、氯化锰等。具体使用中，二者的摩尔浓度应当相当且足够形成沉淀，却不应过量。