[发明专利]识别人程序性死亡受体1的DNA适配体及方法和应用

权利要求书

1.一条特异性识别人程序性死亡受体1的DNA适配体，其特征在于：所述DNA适配体是通过如下方法制备得到；所述DNA适配体的序列如SEQ ID NO.1所示；

所述方法即是产生识别人PD-1N的DNA适配体的筛选方法，包含以下步骤：

(1)用pDisplay/PD-1N重组质粒转染L02细胞，用G418筛选获得L02-PD-1N细胞系；

(2)利用DNA寡核苷酸文库与L02-PD-1N细胞系进行反复的孵育-洗脱-扩增，获得每一轮富集后的亚文库；

还包括步骤(3)：得到各轮富集的ssDNA亚文库通过酶联寡核苷酸吸附试验和流式细胞术测定亲和力最佳的富集分库，随后通过鉴定单个DNA适配体的亲和力筛选出具有较好特异性和亲和力的几条候选DNA适配体；

所述步骤(3)中筛选得到的候选DNA适配体的鉴定方法如下：利用流式细胞术和共聚焦显微镜技术检测DNA适配体的解离常数kd值及特异性结合情况，鉴定出其中最佳的DNA适配体。

2.一种如权利要求1所述的特异性识别人程序性死亡受体1的DNA适配体的应用，其特征在于：以该DNA适配体为核心，利用生物素/荧光/酶标/化学发光标记或多价化修饰用于制备检测结核及肿瘤组织中T淋巴细胞表面的PD-1分子的试剂。