[发明专利]一种利用混合溶剂减少乙基双酮11a羟化过程中杂质的方法有效
| 申请号： | 202010460194.9 | 申请日： | 2020-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN111593086B | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 陈海林;蔡啸;宋盟军;应娟;狄飞飞;汪洋;胡甜 | 申请（专利权）人： | 湖北葛店人福药业有限责任公司 |
| 主分类号： | C12P33/10 | 分类号： | C12P33/10;C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 湖北武汉永嘉专利代理有限公司 42102 | 代理人： | 乔宇 |
| 地址： | 436070 湖北省鄂州市葛店*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 混合 溶剂 减少 乙基 11 过程 杂质 方法 | ||
1.一种利用混合溶剂减少乙基双酮11α羟化过程中杂质的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)采用保藏编号为CGMCC No.3.17278的金龟子绿僵菌菌株，将绿僵菌菌种培养获得绿僵菌菌体，收集菌体；
(2)收集菌体后投料转化：将底物DL-18-甲基-4-雌烯-3,17-二酮采用由DMF和DMSO组成的混合溶剂溶解，所用混合溶剂中按体积比计，DMF：DMSO＝1～20：1，将收集的菌体投入到底物中，将底物转化为11α-羟基-18-甲基雌甾-4-烯-3,17-二酮。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)的转化时间为24-50h。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)的转化温度为20-40℃。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：底物的溶解温度在40-90℃，所用混合溶剂的量为底物投料量的1～20倍。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述底物和菌体的质量比例为1～10：1。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)的培养方法为：
(1.1)将绿僵菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养；
(1.2)将上述菌种在无菌条件下接种于装有液体培养基的摇瓶中，旋转式摇床培养得种子液；
(1.3)培养好的摇瓶种子液转接至小罐培养，获得菌体。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤(1.1)中绿僵菌菌株培养温度为25-32℃，培养时间3-10天；
所述步骤(1.2)中，摇床培养转速为100-200rpm，培养温度为25-32℃，培养时间10-20h；
所述步骤(1.3)中，小罐培养时间为16-48h，培养温度为25-32℃，通气量为0.2-1.2vvm。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的液体培养基为7.5～10g/L葡萄糖、7.5～10g/L黄豆粉、3.5～5g/L蚕蛹粉。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：11α-羟基-18-甲基雌甾-4-烯-3,17-二酮的转化率达到60％，收率达到50％。
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