[发明专利]一种利用混合溶剂减少乙基双酮11a羟化过程中杂质的方法

说明书

本发明涉及一种利用混合溶剂减少乙基双酮11α羟化过程中杂质的方法，包括如下步骤：将绿僵菌菌种培养获得绿僵菌菌体，收集菌体；收集菌体后投料转化：将底物DL‑18‑甲基‑4‑雌烯‑3,17‑二酮采用由DMF和DMSO组成的混合溶剂溶解，将收集的菌体投入到底物中，将底物转化为11α‑羟基‑18‑甲基雌甾‑4‑烯‑3,17‑二酮。本发明方法可明显减少乙基双酮生物羟化产物中杂质的生成，尤其是10α‑OH乙基双酮和6β‑乙基双酮的生成，提升了转化率，并简化了后处理工艺，提高了平均收率。

技术领域

本发明涉及一种利用混合溶剂减少乙基双酮11α羟化过程中杂质的方法。

背景技术

现有技术公开了甾体合成中生物转化的应用，主要包括羟基化、边链降解、双键还原等。相比于化学法，生物转化具有反应温和、污染少、收率高等特点。因此在甾体合成中，通常利用两者的优势配合使用。尽管微生物转化具有独特的优势，但工业应用中常受到实际困难的制约，其中，去氧孕烯合成过程中，乙基双酮的11α羟化是整个合成工艺中关键的一步，目前工业生产中存在产率低、杂质多的情况。因此降低杂质的含量，提高转化率是目前面临的主要问题。

目前乙基双酮的11α-羟化主要采用微生物细胞转化的方法，文献“11α-羟基化左旋乙基甾烯双酮的生物催化”和“金龟子绿僵菌对甾体C11-α羟化反应工艺的研究”都有所报道，所采用的菌株为赭曲霉和绿僵菌，转化率在30-60％，收率在30％左右，转化过程中杂质点多，后处理一步用浓缩低温重结晶方法，需要反复进行4～5次去除杂质，处理过程非常繁琐困难。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单有效的利用混合溶剂减少乙基双酮11α羟化过程中杂质的方法。

为了实现上述目的，本发明提供的技术解决方案如下：

一种利用混合溶剂减少乙基双酮11α羟化过程中杂质的方法，包括如下步骤：

(1)将绿僵菌菌种培养获得绿僵菌菌体，收集菌体；

(2)收集菌体后投料转化：将底物DL-18-甲基-4-雌烯-3,17-二酮采用由DMF和DMSO组成的混合溶剂溶解，将收集的菌体投入到底物中，将底物转化为11α-羟基-18-甲基雌甾-4-烯-3,17-二酮。

按上述方案，所述步骤(2)的转化时间为24-50h。

按上述方案，所述步骤(2)的转化温度为20-40℃。

按上述方案，所述步骤(2)中，所用混合溶剂中按体积比计，DMF：DMSO＝1～20：1。

按上述方案，底物的溶解温度在40-90℃，所用混合溶剂的量为底物投料量的1～20倍。

按上述方案，所述底物和菌体的质量比例为1～10：1。

按上述方案，所述步骤(1)的培养方法为：

(1.1)将绿僵菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基培养；

(1.2)将上述菌种在无菌条件下接种于装有液体培养基的摇瓶中，旋转式摇床培养得种子液；

(1.3)培养好的摇瓶种子液转接至小罐培养，获得菌体。

按上述方案，步骤(1.1)中绿僵菌菌株培养温度为25-32℃，培养时间3-10天。

按上述方案，所述的液体培养基为7.5～10g/L葡萄糖、7.5～10g/L黄豆粉、3.5～5g/L蚕蛹粉。

按上述方案，所述步骤(1.2)中，摇床培养转速为100-200rpm，培养温度为25-32℃，培养时间10-20h。