[发明专利]一种产碱假单胞菌Pseudomonas sp.H3，筛选方法及用途

权利要求书

1.一种产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) H3，其特征在于，所述产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) H3的保藏编号为CGMCC No.19713。

2.一种如权利要求1所述产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) H3的用途，所述用途是指用于将餐厨废油脂合成聚羟基脂肪酸酯的用途。

3.如权利要求2所述用途，其特征在于，所述餐厨废油脂为煎炸废油脂，蒸煮废油脂，地沟油，潲水油，餐厨垃圾处理后分离得到的混合废油脂，植物、动物提取的废弃油脂或者上述任意两种或者两种以上的混合。

4.如权利要求2所述用途，其特征在于，所述聚羟基脂肪酸酯其结构单体包含C₈，C₁₀和C₁₂单体的3-羟基脂肪酸酯。

5.一种利用权利要求1所述产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) H3合成聚羟基脂肪酸酯的方法，其特征在于，包括如下步骤，

种子液和菌悬液的制备：将产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) H3接种至LB培养基中培养至对数生长期；获得种子液，种子液通过离心获得的菌体通过添加生理盐水制备成OD600=1.0-2.0的菌悬液；

接种：无机盐培养基2中添加10-50 g/L的餐厨废油脂，接种1%-5%的上述所得菌悬液后摇床培养；

菌体分离及净化：将上述培养物离心得到菌体，向菌体中加入去离子水或超纯水稀释10-15倍充分混合后，再加入和待稀释菌液等体积的正己烷以去除杂质和油脂，离心、冷冻干燥后得到干菌体；

聚羟基脂肪酸酯的提取：往所得干菌体中加入氯仿，超声处理以破碎细胞；之后利用水浴磁力搅拌器在80-100℃充分加热搅拌3-6 h；离心去除菌渣，初步得到氯仿相的聚羟基脂肪酸酯；

聚羟基脂肪酸酯的纯化：向氯仿相的聚羟基脂肪酸酯中加入2%-5%的去离子水或超纯水充分震荡洗涤后离心得到纯净氯仿相的聚羟基脂肪酸酯，最后将纯净氯仿相的聚羟基脂肪酸酯倒入通风橱中的培养皿，氯仿完全挥发后得到纯化的聚羟基脂肪酸酯；

所述无机盐培养基2的组成为：KH₂PO₄: 1.5 g/L; Na₂HPO₄· 12H₂O: 8.95 g/L ;MgSO₄: 0.098 g/L; CaCl₂: 0.0076 g/L; 1 mL/L微量元素液，氮源：0.32 g N/L；所述微量元素液为H₃BO₃：0.3 g/L；CoCl₂· 6H₂O: 0.2 g/L; MnCl₂· 4H₂O: 0.03 g/L; NaMO₄·2H₂O: 0.03 g/L; NiCl₂· 6H₂O: 0.02 g/L; CuSO₄· 5H₂O: 0.01 g/L; ZnCl₂: 0.047 g/L。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述种子液和菌悬液的制备为将产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes) H3接种至LB培养基中培养12-16 h后获得种子液，种子液通过离心获得的菌体通过添加生理盐水制备成OD600=1.0-2.0的菌悬液。