[发明专利]一种鳜鱼传染性脾肾坏死病PCR快速检测试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种鳜鱼传染性脾肾坏死病PCR快速检测试剂盒及检测方法，包括PCR试剂管、DL5000 DNA Maker、GoldView DNA染料、6X Loading Buffer、阴性和阳性对照品、检测胶、1 X TAE电泳缓冲液和DNA分子量标准maker，并发明了特异性的扩增程序，使得扩增结果特异性强，结果可靠性高，能够使鳜鱼养殖户尽快进行针对性的防控和治疗，减少养殖损失；也能够运用于传染性脾肾坏死病的大规模检测和防控；还可用于传染性脾肾坏死病的分子流行病学调查监测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体是一种鳜鱼传染性脾肾坏死病PCR快速检测试剂盒及方法。

背景技术

鳜鱼是我国淡水养殖品种。传染性脾肾坏死病毒是鳜鱼重大疫病病原，该病毒引发的鳜鱼传染性脾肾坏死病病毒流行快、发病率高，并且目前尚无有效控制措施，严重影响级鱼养殖业的发展。近年来，养殖鳜鱼发生大面积的暴发性流行病，导致鳜鱼大量死亡，造成严重的损失。由于水生动物病毒类疾病目前尚无特效治疗药物，因此推行鳜鱼的健康养殖是最有效的预防措施，而这主要依赖于早期的快速检测。目前通用的检测方法是电子显微镜法：进行病鱼脾、肾组织石蜡切片，HE染色，显微镜观测被感染细胞肿大3～4倍；进行病鱼脾、肾组织超薄切片，投射电镜下观测到病毒颗粒该方法简便易行，但敏感性较低，特异性弱，容易误判，其次对于鳜鱼病毒的检测方法还有生物指示法、生化检测法、免疫学方法、免疫电镜技术、细胞培养方法、分子生物学方法。这些检测方法有些对技术条件要求高，检测时间长，费用高，因此对于广大养殖户的快速准确的检测方法，难以推广，限制了这些技术的应用和发展。

因此，急需研究一种经济实惠、简便快捷的诊断方法。

目前对于鳜鱼病毒的检测方法有电子显微镜法、生物指示法、生化检测法、免疫学方法、免疫电镜技术、细胞培养方法、分子生物学方法。这些检测方法有些对技术条件要求高，设备投入大、检测时间长，费用高，因此对于广大文化程度不高的基层养殖户掌握利用这些技术快速准确判断病原不现实，难以应用和推广，限制了这些技术的应用和发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鳜鱼传染性脾肾坏死病PCR快速检测试剂盒及方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种鳜鱼传染性脾肾坏死病PCR快速检测试剂盒，包括PCR试剂管、DL5000DNAMaker、 GoldViewDNA染料、6XLoadingBuffer、阴性和阳性对照品、检测胶、1XTAE电泳缓冲液和 DNA分子量标准maker。

作为本发明的进一步技术方案：所述PCR试剂管中包含10ⅹbuffer(Mg²⁺)、TaqDNA聚合酶、dNTP、ddH₂O、引物一对。

作为本发明的进一步技术方案：所述引物包括上游引物和下游引物，上游引物简称 ORF007LF，引物序列为CGACACAAAGATACGCAGCAC，下游引物简称ORF007LR，引物序列为GCCACAAACAGCATCAAGCA。

作为本发明的进一步技术方案：所述引物的扩增片段长度为162bp。

作为本发明的进一步技术方案：阳性对照品为鳜鱼传染性脾肾坏死病DNA片段的DNA 样本；阴性对照品为健康鳜鱼DNA的DNA样本。

作为本发明的进一步技术方案：所述PCR试剂管、DL5000DNAMaker、GoldViewDNA染料、6XLoadingBuffer、阴性和阳性对照品、检测胶、1XTAE电泳缓冲液和DNA分子量标准maker的均保存于-20摄氏度。

一种鳜鱼传染性脾肾坏死病PCR快速检测方法，包含以下步骤：

A、用DNA提取试剂盒提取鳜鱼传染性脾肾坏死病病样的肝、脾、肾组织的DNA；