[发明专利]一种荧光微球标记抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明是关于一种荧光微球标记抗体及其制备方法和应用，该制备方法包括：将100‑1000mg/mL的化学交联剂溶液加入1‑50mg/mL的荧光微球溶液中进行活化；将标记抗体和质控蛋白进行混合，得到总蛋白，将该总蛋白加入得到的活化产物中进行反应；将封闭剂加入得到的溶液中进行封闭，离心，得到所述荧光微球标记抗体。本发明使用标记抗体/抗原与一种其他蛋白同时标记在标记物表面，不仅降低了标记抗体/抗原的用量，降低了成本；而且可以使得标记抗体/抗原的原有性能保持良好的稳定。

技术领域

本发明涉及一种荧光微球标记抗体及其制备方法和应用，属于免疫检测技术领域。

背景技术

对某些抗原或特异性蛋白进行检测时，通常会应用到免疫标记技术。免疫标记技术(immunolabelling techniques)是指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂作为示踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应，借助于荧光显微镜、酶标检测仪等仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞以及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性定量测定。免疫标记示踪物与抗体或抗原一般通过化学键结合，通过这些标记物的增强放大作用来对反应体系中抗原或者抗体进行定性或定量检测。

由于标记采用的标记物和检测方法不同，免疫标记技术主要分为：胶体金、乳胶、荧光素、酶和放射性核素标记等。在标记应用中，由于应用原理不同，这些免疫标记技术都存在不同的缺陷。例如在胶体金标记技术中，虽然检测操作简单，但是物质本身存在灵敏度低、线性范围窄的缺点；在荧光素标记技术中，标记所用荧光素存在荧光强度和荧光稳定性的问题，且标记到抗原或抗体上的方法复杂；酶标记技术中，酶的储存环境和反应条件较为严格，标记物本身容易失活，从而影响待测物的检出限；放射性核素标记技术中，虽然核素检测灵敏度极高但核素具有放射性，存在强烈的安全隐患，在生产操作过程中容易造成环境污染和健康危害。这些方法在临床应用过程中，也存在不同的问题。比如胶体金和乳胶肉眼判读，多用作简单的定性判断，这就存在一定的人为主观性，同时要求样本中相关检测物质的含量达到一定量或标记物的灵敏度较好，容易出现假阴、假阳结果；荧光素标记技术、酶标技术、放射性核素技术的操作过程较为复杂且需要设备支持，设备的维护费用较为昂贵，同时不利于携带和搬运。

除了标记物的选择和标记技术上的问题外，免疫标记使用的特异性抗体或抗原也是关键点。现应用于免疫标记的特异性抗体或抗原，由于厂家的制作工艺和水平不一，抗体或抗原的性价比各不相同，表现在虽然高质量的抗体或抗原特异性高、灵敏度好，但价格也相对昂贵，国内外厂家生产的抗原均存在该问题。国外厂家进口抗体或抗原还存在生产量或库存量固定且运输周期长的问题，这使得很多免疫试剂厂家对于研发和生产需要投入很多经费与时间。特异性抗体或抗原由于制作工艺和特异性的要求较为严格，价格本身普遍高于比一般抗体或蛋白。如何在保证产品性能良好的情况下，降低研发成本，提高研发生产效率是很多试剂厂家关心的问题。

因此，目前市场对研发成本低、操作简单、结果判读客观、高灵敏度的免疫标记方法和检测技术有进一步的需求。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种荧光微球标记抗体及其制备方法和应用。

为了达成上述的目的，本发明提供了一种荧光微球标记抗体的制备方法，包括以下步骤：

1)将100-1000mg/mL的化学交联剂溶液加入1-50mg/mL的荧光微球溶液中进行活化；

2)将标记抗体和质控蛋白进行混合，得到总蛋白，将该总蛋白加入步骤1)得到的活化产物中进行反应；

3)将封闭剂加入步骤2)得到的溶液中进行封闭，离心，得到所述荧光微球标记抗体。