[发明专利]一种外泌体在制备修复皮肤损伤的药品或化妆品中的应用

说明书

一种外泌体在制备修复皮肤损伤的药品或化妆品中的应用，属于皮肤治疗技术领域。针对如何解决皮肤损伤的问题，本发明从原代鹿茸组织中分离获得间充质干细胞；经体外扩大培养，收集细胞培养液，经分离提取获得鹿茸间充质干细胞来源的外泌体。经证实，能够通过NLRP3炎症小体信号通路抑制LPS诱导的HaCat细胞的炎症反应，能够加快皮肤损伤小鼠模型的创面修复、减轻炎症反应。本发明可用于制备治疗皮肤损伤修复药物或化妆品。

技术领域

本发明属于皮肤治疗技术领域，具体涉及一种外泌体在制备修复皮肤损伤的药品或化妆品中的应用。

背景技术

皮肤是人体第一大器官，作为人体的保护屏障，具有防护外来机械损伤、防止病原微生物和化学性物质入侵机体的重要作用。皮肤损伤有外力导致的机械损伤和病理损伤，例如：日常生活中皮肤损伤，糖尿病患者并发症导致的慢性难愈合病理损伤。研究表明，在皮肤损伤修复过程中抑制炎症是促进皮肤损伤修复愈合的关键。炎症是指先天免疫系统被激活，入侵的病原体攻击皮肤组织产生的反应。目前相关研究报道表明，在治疗皮肤损伤修复中的外泌体，主要来源于脐带、骨髓、脂肪间充质干细胞，在细胞培养过程中质量不易控制。

发明内容

针对如何解决皮肤损伤修复的相关问题，本发明提供一种快速便捷的制备鹿茸间充质干细胞外泌体的技术方法及其在皮肤损伤修复过程中的应用。具体技术方案如下：

一种外泌体在制备修复皮肤损伤的药品或化妆品中的应用，所述外泌体提取自鹿茸间充质干细胞。

进一步地限定，所述皮肤损伤包括擦伤、皮肤破损、烧伤、皮肤创面感染和慢性难愈合创面损伤。

进一步地限定，所述鹿茸外泌体通过如下方法制备获得：

1)鹿茸间充质干细胞的原代分离：将鹿茸组织经预处理后，取其间充质区，分离获得间充质干细胞；

2)鹿茸间充质干细胞外泌体的提取：将步骤1)中获得的间充质干细胞经培养后，收集细胞培养液，经分离提取得到外泌体。

进一步地限定，步骤1)所述鹿茸组织为新鲜鹿茸的组织，位于鹿茸尖部区域。

进一步地限定，步骤1)所述预处理是指剥去鹿茸真皮层，将鹿茸组织经含有双抗的PBS清洗后，再用高糖培养基清洗，然后离心弃上清，得到间充质区；所述双抗是指终浓度为100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素，所述PBS是指磷酸盐缓冲液。

进一步地限定，步骤1)所述间充质干细胞通过如下方法获得：将预处理后的间充质区切块，置于含有双抗的低糖培养基中混匀，加入PBS混匀后离心，弃上清，获取间充质干细胞团，然后经胶原酶I消化，得到间充质干细胞；所述双抗是指终浓度为100U/mL的青霉素和终浓度为100μg/mL链霉素。

进一步地限定，步骤2)所述培养是指将间充质干细胞置于10％无外泌体胎牛血清DMEM/F12培养基中，37℃和5％CO₂条件培养36h。

进一步地限定，步骤2)所述分离提取是指将收集的细胞培养液离心，收取上清液后进行离心处理，获得的上清液过滤后再次离心，弃上清，向沉淀中加入PBS混匀得到悬液，将悬液离心后弃上清，加入PSB溶液后静置，然后过滤，获得鹿茸间充质干细胞来源的外泌体。

进一步地限定，所述胶原酶I用量为细胞体积的4-5倍，所述胶原酶的浓度为0.075g/mL。

进一步地限定，步骤2)所述收取上清液后进行离心处理中，离心处理是指将细胞上清液经1,500×g离心15min，收取上清；再经10，000×g离心30min；所述悬液离心条件为120,000×g离心60min。

进一步地限定，所述过滤均为经过0.22μm滤器进行过滤；所述静置时间为15min。

有益效果