[发明专利]一种鱼安定半抗原、抗原和抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种鱼安定半抗原、人工抗原、抗体及其制备与应用。鱼安定半抗原具有式I所示的分子结构（式I），鱼安定人工抗原具有式II所示的分子结构（式II）。目前有关于鱼安定半抗原及人工抗原合成也鲜有报道，与其相关免疫检测方法也较少，而现有的鱼安定检测技术主要以仪器法为主，而仪器法操作复杂，前处理要求高，成本高。利用本发明的人工抗原免疫动物得到的抗血清效价高，得到的抗体特异性高、灵敏度好，可用于构建鱼安定免疫快速方法和研制免疫检测试剂盒，满足鱼安定残留的检测需求。

技术领域

本发明属于食品安全免疫检测技术领域，更具体地，涉及一种鱼安定的半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法与应用。

背景技术

随着人们对食品安全的关注及诉求日益增加，食品中的药物的残留已经成为了一个社会热点问题。鱼安定作为渔用麻醉剂可使鱼体内代谢强度降低，使鱼行动迟缓，进入类似休眠状态，从而防止鱼在容器中剧烈运动而造成伤害，降低鱼类在长途运输过程中的死亡率，减少经济损失。由于具有易溶于水、见效快、复苏时间短等优点，鱼安定目前广泛用作流通环节的鱼体麻醉剂，也是目前唯一被美国食品药物管理局批准能用于食用鱼的麻醉剂。除美国，还有欧盟、加拿大等国家也都允许鱼安定作为鱼用麻醉剂，但是美国限定其休药期为 21d，最大残留量(MRL)为 1 μg/mL，加拿大休药期为5d，都有着严格的使用标准。因此，建立快速检测准确检测水产品中鱼安定残留水平的分析方法，对规范鱼安定使用，保障水产品安全意义重大。

目前，鱼安定的监测，主要依赖仪器分析方法，如高效液相色谱法-串联质谱法、液相色谱-串联质谱法、液相色谱法。这些方法虽然检测结果准确可靠，但是依赖昂贵仪器，不仅费时费力，且操作要求高，不适宜大批量的快速筛选，因此，需发明一种针对鱼安定的快速、简便的检测方法。基于抗原-抗体特异性结合的免疫分析法具有样品前处理简便、操作简单、快速、灵敏、检测成本低等特点，被誉为是21世纪最具竞争和挑战的快速检测技术，在食品安全领域具有广阔的应用前景。目前尚未见有关鱼安定免疫检测研究报道。

发明内容

本发明针对现有技术中鱼安定检测的不足，提供了一种鱼安定的半抗原及其相应的人工抗原和抗体及其制备方法。

本发明的另一目的在于提供了所述半抗原、人工抗原和抗体的应用。

本发明的另一目的在于提供一种检测鱼安定的免疫分析方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。

第一方面，一种鱼安定半抗原，其具有如下式I的分子结构：

式I。

上述鱼安定半抗原的制备方法，包括如下步骤：将鱼安定与具对醛基苯甲酸在甲醇中发生缩合反应后，经硼氢化钠还原后得到如式I分子结构的鱼安定半抗原。

具体地，所述鱼安定半抗原的制备方法，包括如下步骤：

S11. 将鱼安定溶于适量的甲醇中；

S12. 待S11溶解后加入1~2mL三乙胺；

S13. 将与S11等摩尔比的苯醛酸在适量甲醇中溶解后，搅拌条件下缓慢滴加到S1中；

S14. 在80℃下冷凝回流反应2-3h；

S15. 加入0.12~0.2 g硼氢化钠还原，50℃冷凝回流1-2h；

S16. 旋转蒸发干后得到黄色油状物质，水溶后用乙酸乙酯萃取3次，再将乙酸乙酯萃取液旋干，得到淡黄色粉末；

S17. 将上述淡黄色粉末过硅胶柱，石油醚:乙酸乙酯=3:1洗脱，然后蒸干所得即为如式I所示的鱼安定半抗原。

第二方面，一种鱼安定的人工抗原，其具有如下的分子结构：