[发明专利]一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法

说明书

本发明属于天然植物提取技术领域，具体涉及一种从白芸豆中提取α‑淀粉酶抑制剂的方法。一种从白芸豆中提取α‑淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1)白芸豆的预处理；S2)白芸豆粗提液的制备；S3)初步纯化α‑淀粉酶抑制剂的制备；S4)α‑淀粉酶抑制剂的制备。本发明的方法能够从白芸豆中得到α‑淀粉酶抑制剂，具有较高的提取率，且α‑淀粉酶抑制剂具有较高的抑制率，适应了社会的需求。

技术领域

本发明属于天然植物提取技术领域，具体涉及一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法。

背景技术

α-淀粉酶抑制剂(α-A1)是一种能够特异性抑制人体唾液和肠道内α-淀粉酶活力的蛋白质，分子量为30.0～36.0ku，属于糖苷水解酶抑制剂。近年来，α-淀粉酶抑制剂已成为研究的热点，研究者已从许多植物种子的胚乳和微生物的代谢产物中分离得到了α-淀粉酶抑制剂。白芸豆生物学名为多花菜豆，是一种世界范围内广泛种植的豆类作物，其营养丰富，1945年Browman在白芸豆中发现了α-淀粉酶抑制剂，而更多的研究发现：从白芸豆中提取的α-淀粉酶抑制剂具有更高的抑制活性、安全无副作用等。

目前，虽然α-淀粉酶抑制剂是研究的热点，但是有关白芸豆α-淀粉酶抑制剂的产品很少被提起，这可能是现有从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法主要为色谱层析柱，工艺复杂，如中国专利CN103638089A公开了一种利用微波-复合酶耦合法从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法，将白芸豆粉碎后通过微波-复合酶耦合处理将白芸豆中α-淀粉酶抑制剂加速从白芸豆粉中溶解析出，再经超滤、离子柱层析精制可得。还有可能是由于现有的工艺不能得到活性较高的α-淀粉酶抑制剂，该原因可能为白芸豆中的植物凝集素(PHA)和胰蛋白酶抑制剂(TI)的存在会降低α-淀粉酶抑制剂的抑制效果，从而限制了其实际的应用。因此，开发一种可工业化提取白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的方法具有十分重要的意义。

发明内容

本发明旨在提供一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法，本发明的方法能够从白芸豆中得到α-淀粉酶抑制剂，具有较高的提取率，提取率达到7％以上，且α-淀粉酶抑制剂具有较高的抑制率，抑制率达到75％以上。

一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法，包括以下步骤：

S1)白芸豆的预处理；取白芸豆过筛去除杂质，再粉碎过筛后置于35～40℃烘箱中干燥，得到白芸豆粉；

S2)白芸豆粗提液的制备；将步骤S1中的白芸豆粉加提取溶剂进行提取，离心取上清液，0.22μm滤膜超滤，得到白芸豆粗提液；

S3)初步纯化α-淀粉酶抑制剂的制备；将步骤S2中的白芸豆粗提液的pH调至3.6，沉降1～1.5h，离心，收集上清液，再将上清液的pH调至6.8后，用无水乙醇将上清液中的乙醇浓度调至70％，搅拌，离心，收集沉淀物，将沉淀物用pH为6.9的磷酸缓冲盐溶液溶解得到初步纯化α-淀粉酶抑制剂。

S4)α-淀粉酶抑制剂的制备；将步骤S3中的初步纯化α-淀粉酶抑制剂用超滤管超滤，得到截留液，再将截流液置于双层透析袋中透析，真空冷冻干燥，即得。

发明人通过检索后得知α-淀粉酶抑制剂在等电点附近基本不沉降，而植物凝集素和胰蛋白酶抑制剂在pH为3.6时会发生显著沉降，因而在本发明中，通过步骤S2来除去植物凝集素和胰蛋白酶抑制剂，减少对α-淀粉酶抑制剂抑制率的影响。