[发明专利]特异性检测TWI型传染性支气管炎病毒的反转录-实时荧光定量PCR试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种特异性检测TW I型传染性支气管炎病毒的反转录‑实时荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的试剂盒中至少含有两套引物和探针之一，其中第一套检测引物如SEQ ID NO.8－9所示，探针序列如SEQ ID NO.10所示，所述荧光探针5和3’端分别标记6‑FAM基团和MGB基团；第二套检测引物如SEQ ID NO.11－12所示，探针序列如SEQ ID NO.13所示，所述荧光探针5和3’端分别标记6‑FAM基团和MGB基团。本发明的试剂盒敏感性高，特异性好，重复性好，能特异性检测TW I型IBV，对于TW I型IBV临床病例快速鉴别诊断和流行病学监测具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)试剂盒及其应用，特别涉及一种特异性检测TW I型传染性支气管炎病毒(IBV)的RT-qPCR试剂盒及其应用。本发明属于生物医药技术领域。

背景技术

鸡传染性支气管炎((Infectious bronchitis，IB))是鸡的一种重要病毒性传染病，病原为鸡传染性支气管炎病毒((Infectious bronchitis virus，IBV))。IBV属于冠状病毒科冠状病毒属中的γ冠状病毒，其基因组为不分节段的单股正链RNA。大量研究表明，IBV易发生基因突变，导致IBV不时出现新的基因型并引起不同毒株之间存在较大的抗原差异，使病毒检测和免疫预防日益复杂化。为有效控制本病的流行，加强病毒感染的监测，科研人员开发建立了大量的血清学、分子生物学等检测方法，但这些方法普遍存在无法区分不同血清型IBV感染的不足，达不到鉴别诊断的要求，尤其是针对新出现的一些血清型的毒株，更是缺乏有效鉴别诊断的方法。实时荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、反应速度快、重复性好的优点，通过设计型特异性引物和探针，可以快速、准确地区分不同血清型病毒的感染，达到鉴别诊断的目的。

TW I型IBV也被归为GI-7型(Valastro V,et al.S1 gene-based phylogeny ofinfectious bronchitis virus:An attempt to harmonize virusclassification.Infect Genet Evol,2016,39:349-364.)，自2009年该型病毒首次被报道传入中国大陆地区以来，该型病毒在我国的流行范围迅速扩大。根据国内多个研究团队对临床发病鸡群IBV流行病学监测结果显示TW I型IBV分离率目前已经位居第二，说明该型病毒感染所产生的危害日趋严重，应当引起足够重视。因此，本发明旨在提供一种定量检测TWI型IBV的RT-qPCR试剂盒，为监测可能出现的TW I型IBV的流行提供技术支持。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可特异性检测TW I型IBV的RT-qPCR试剂盒。

本发明的难点在于选择的引物和探针结合位点既要在不同基因型IBV毒株间具有较大的差异，以达到特异性区分不同基因型毒株的目的，而且相应序列的碱基组成、Tm值等条件还必须同时满足qPCR引物和探针设计的要求。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：