[发明专利]一种检测血浆中抗肿瘤药物浓度的方法

权利要求书

1.一种检测血浆中抗肿瘤药物浓度的方法，

所述抗肿瘤药物分别为：甲氨喋呤、7-羟基甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、紫杉醇和多西他赛；

上述抗肿瘤药物对应的同位素内标物分别为：甲氨喋呤-d3、7-羟基甲氨蝶呤-d3、氟尿嘧啶-13C,15N2、紫杉醇-d5和多西他赛-d5；

采用超高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的血浆中的上述抗肿瘤药物，先利用超高效液相色谱将目标待测物与血浆基质中的干扰组分进行分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算血浆中抗肿瘤药物的含量，具体色谱条件为：

(1)超高效液相色谱条件：

流动相A：0.05％～0.2％甲酸水溶液；流动相B：乙腈；

色谱柱型号：ACQUITY UPLC HSS T3；

采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，所述梯度洗脱过程如下：在0.0-1.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由99:1匀速渐变至70:30；在1.0-2.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比由70:30匀速渐变至2:98；在2.5-3.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持2:98不变；在3.0-5.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由2:98匀速渐变至99:1；每个样品采集时间为5min；

(2)质谱条件：

在电喷雾电离检测模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式；喷雾电压为3.0kV(ESI+)及2.5kV(ESI-)；去溶剂温度为120℃；雾化气温度为500℃，雾化气流速为800L/h，锥孔气流速为150L/h；同时监测各目标物以及同位素内标。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述流动相A为0.05％～0.15％甲酸水溶液；流速为0.2～0.5mL/min；柱温为35～50℃；进样体积为0.2～10μL。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述流动相A为0.1％甲酸水溶液；所述流速为0.3mL/min；所述柱温为40℃；所述进样体积为1μL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血浆为人或动物血浆。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述经过预处理的血浆按照如下方法制备：向血浆中加入含内标的蛋白沉淀剂，再振荡离心后取上清液；所述蛋白质沉淀剂为异丙醇与乙腈混合溶液；优选地，所述蛋白质沉淀剂中异丙醇与乙腈的体积比1:1～3，更优选地，所述蛋白质沉淀剂中异丙醇与乙腈的体积比1:2。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

所述经过预处理的血浆按照如下方法制备：取50μL血浆于1.5mL离心管中，向其中加入200μL含内标的蛋白沉淀剂，在12000～15000r/min，1～5℃离心4～10min后，转移离心管中的上清液60μL至塑料内衬管中，待进样；所述蛋白质沉淀剂中异丙醇与乙腈的体积比1:2。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，

所述含内标的蛋白沉淀剂按照如下方法制备：

将10μg/mL甲氨喋呤-d3同位素内标母液、10μg/mL 7-羟基甲氨蝶呤-d3同位素内标母液、500μg/mL氟尿嘧啶-13C,15N2同位素内标母液、50μg/mL紫杉醇-d5同位素内标母液和10μg/mL多西他赛-d5同位素内标母液以甲醇水溶液配制成包含有100ng/mL甲氨喋呤-d3、100ng/mL 7-羟基甲氨蝶呤-d3、5000ng/mL氟尿嘧啶-13C,15N2、500ng/mL紫杉醇-d5和500ng/mL多西他赛-d5的混合内标液；取200μL上述混合内标液，加入19.8mL蛋白沉淀剂，混合均匀得含内标的蛋白沉淀剂。