[发明专利]一种人参属中药中皂苷成分的分离方法

权利要求书

1.一种人参属中药中皂苷成分的分离方法，包括：

以体积分数为60-80％的甲醇水溶液为溶剂，配制浓度为500-1000mg/mL的待测品溶液；

(1)将所述待测品溶液经离子交换色谱进行第一维分离，获得第一分段样品组；

其中，离子交换色谱分离条件包括：

固定相：强阴离子交换色谱柱；

流动相：A相为含有体积分数为0.05-0.15％冰醋酸的9.5-10.5mM醋酸铵水溶液，B相为甲醇；

采用15-25％A相，75-85％B相进行等度洗脱；柱温30-40℃；流速0.5-0.7mL/min；

(2)将所述第一分段样品组中的各样品，经亲水相互作用色谱进行第二维分离，获得第二分段样品组；

其中，亲水相互作用色谱分离条件包括：

固定相：酰胺基键合亚乙基杂化硅胶色谱柱；

流动相：A相为0.01-1％甲酸水溶液，B相为乙腈；采用10-50％A相，50-90％B相进行梯度洗脱；柱温30-40℃；流速0.5-1.5mL/min；

其中，所述亲水相互作用色谱分离条件中，梯度洗脱具体为：0-12分钟，90-83％B；12-14分钟，83-81％B；14-24分钟，81-74％B；24-25分钟，74-50％B；25-30分钟，50％B；30-31分钟，50-90％B；31-37分钟，90％B；

(3)将所述第二分段样品组中的各样品，经反相色谱进行第三维分离；

其中，反相色谱分离条件包括：

固定相：极性修饰十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：A相为0.01-1％甲酸水溶液，B相为乙腈；采用5-85％A相，15-95％B相进行梯度洗脱；柱温30-40℃；流速0.2-0.4mL/min；

经反相色谱分离后的样品通过质谱检测，获得人参属中药中皂苷成分的质谱图；

其中，所述反相色谱分离条件中，梯度洗脱具体为：0-5分钟，15％-23％B；5-15分钟，23-28％B；15-22分钟，28-29％B；22-33分钟，29-36％B；33-33.5分钟，36-55％B；33.5-37分钟，55-95％B；37-40分钟，95％B。

2.根据权利要求1所述的分离方法，其中，所述第一分段样品组中包括两个分段样品，其中0-9分钟的分段样品为中性皂苷分段样品，9-50分钟的分段样品为酸性皂苷分段样品。

3.根据权利要求1所述的分离方法，其中，所述质谱为四极杆-静电场轨道阱质谱，质谱条件包括：

采用ESI离子源，在负离子模式下，采用Full MS/dd-MS²扫描方法，参数设置如下：FullMS全扫描范围m/z 250-1500，分辨率为70,000；MS²扫描分辨率为13,500；动态排除时间为8.0s，分离宽度为6.0m/z。

4.根据权利要求3所述的分离方法，其中，所述ESI离子源的参数设置包括：

喷雾电压值：2.5-3.5kV，毛细管温度：300-400℃，辅助气温度：350-450℃，碰撞能量：20/30/40V，鞘气：30-40arb，辅助气：5-15arb，吹扫气：0-5arb；其中鞘气、辅助气和吹扫气均为氮气。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离方法，还包括：

将获得的化合物的保留时间、质谱图与已知皂苷成分的保留时间、质谱图进行比对，确定人参属中药中的皂苷成分。