[发明专利]高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的方法、ELISA试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的方法，其特征在于：利用抗CD63抗体、抗CD9抗体或抗CD81抗体特异性捕获细胞外囊泡，利用抗PD-1抗体检测细胞外囊泡中PD-1蛋白水平，利用构建的对应的CD63-PD-1融合蛋白、CD9-PD-1融合蛋白或CD81-PD-1融合蛋白作为标准品实现对细胞外囊泡中PD-1的定量检测。

2.根据权利要求1所述的高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的方法，其特征在于：所述CD63-PD-1融合蛋白的核酸序列如SEQ ID No：1所示，CD9-PD-1融合蛋白的核酸序列如SEQ ID No：2所示，CD81-PD-1融合蛋白的核酸序列如SEQ ID No：3所示。

3.根据权利要求1所述的高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的方法，其特征在于：所述细胞外囊泡来自于血液、唾液、尿液、脑脊液、腹腔积液、胸腔积液、汗液、精液、淋巴液、细胞培养上清中的任意一种。

4.一种高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的ELISA试剂盒，其特征在于：包括ELISA酶标板、封板膜、标准蛋白、标准蛋白稀释液、样品稀释液、浓缩洗涤液、酶标抗体A、酶标抗体B、显色剂A液、显色剂B液和终止液；

其中，所述ELISA酶标板为按1-5μg/mL浓度提前包被好抗CD63抗体、抗CD9抗体或抗CD81抗体的酶标板；

所述标准蛋白为构建的CD63-PD-1或CD9-PD-1或CD81-PD-1融合蛋白。

5.根据权利要求4所述的高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的ELISA试剂盒，其特征在于：所述抗CD63抗体为Thermo Fisher公司的抗CD63抗体，货号TJ26539346；所述抗CD9抗体为Thermo Fisher公司的抗CD9抗体，货号TL2686763；所述抗CD81抗体为Novus公司的抗CD81抗体，货号531413。

6.根据权利要求4所述的高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的ELISA试剂盒，其特征在于：所述CD63-PD-1融合蛋白的核酸序列如SEQ ID No：1所示，CD9-PD-1融合蛋白的核酸序列如SEQ ID No：2所示，CD81-PD-1融合蛋白的核酸序列如SEQ ID No：3所示。

7.根据权利要求4所述的高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的ELISA试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为含0.01-0.05mol/L PBS、按质量百分数1‰-5‰的Tween-20的水溶液；所述酶标抗体A为1μg/mL PD-1检测抗体，所述酶标抗体B为1μg/mL辣根过氧化物酶耦联显色抗体。

8.根据权利要求4所述的高效定量检测细胞外囊泡中PD-1水平的ELISA试剂盒，其特征在于：所述显色剂A液按质量百分比计包括醋酸钠2.72％、柠檬酸0.32％、双氧水0.02％，配置于蒸馏水中；所述显色剂B液按质量百分比计包括乙二胺四乙酸二钠0.04％、柠檬酸0.19％、甘油9％、3,3’,5,5’-四甲基联苯胺0.03％，配置于蒸馏水中；所述终止液为2mol/L稀硫酸。