[发明专利]一种代谢工程改造大肠杆菌制备α-酮异戊酸的方法

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌偶联表达乙酰乳酸合成酶、乙酰乳酸异构还原酶和二羟基酸脱水酶；将乙酰乳酸异构还原酶、乙酰乳酸合成酶、二羟基酸脱水酶顺次连接进行表达；所述重组大肠杆菌沉默了支链氨基酸转氨酶B基因、异丙基苹果酸合酶基因的表达；所述支链氨基酸转氨酶B基因在NCBI上的登录号为948278；所述leuA在NCBI上登录号为947465；所述重组大肠杆菌过表达吡啶核苷酸转氢酶基因；所述吡啶核苷酸转氢酶基因是由pntA和pntB组成的基因簇，所述pntA在NCBI上的登录号为946628；所述pntB在NCBI上的登录号为946144。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，乙酰乳酸异构还原酶与二羟基酸脱水酶添加了终止子。

3.根据权利要求2所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述乙酰乳酸异构还原酶在NCBI上的登录号为948286；所述乙酰乳酸合成酶在NCBI上的登录号为936852；所述二羟基酸脱水酶在NCBI上的登录号为948277。

4.根据权利要求1～3任一项所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以大肠杆菌B0016-050或者大肠杆菌BL21(DE3)为宿主。

5.一种生产α-酮异戊酸的方法，其特征在于，利用权利要求1～3任一项所述重组大肠杆菌为发酵菌株，以葡萄糖或丙酮酸钠为底物，生产α-酮异戊酸。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，以100～200rpm培养菌株。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，当所述重组大肠杆菌发酵至OD₆₀₀为1.5～2.5时，用IPTG进行诱导。

8.权利要求1～3任一项所述重组大肠杆菌，或权利要求5～7任一所述方法在药物分析、食品分析、环境监测、物化工程和生物制药领域中制备α-酮异戊酸中的应用。