[发明专利]常温等温快速检测副溶血弧菌的引物、探针、试剂和方法

权利要求书

1.一种常温等温快速检测副溶血弧菌的引物和探针，其特征在于，上下游引物和探针的序列具体如下：

上游引物VP-4-F：CAACGACGCAGCAATGCAGCCAGATCAAATCAAC

下游引物VP-4-R：GTAAACAAGGTGTTTGCTGGTTTGTAGTTCTTC

探针VP-Probe：

CATCACAATGGCGCTTCCCTAACCCGAACAGC(F)G(H)(B)TCTTAGGTCACTTCTC—Spacer C3。

2.一种常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物和探针。

3.根据权利要求2所述的常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂，其特征在于，所述试剂包括聚乙二醇、Tris、乙酸钠、二硫苏糖醇、酸磷酸腺苷、磷酸肌酸二钠盐、磷酸肌酶、脱氧核糖核苷三磷酸、海藻糖、甘露醇、重组酶、单链DNA结合蛋白、DNA聚合酶和核酸外切酶。

4.根据权利要求3所述的常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂，其特征在于，所述试剂的制备方法包括：

将反应液在-80℃条件下预冻1～1.5小时得到预冻试剂；

将预冻试剂先置于-35～-45℃环境下干燥2～10小时，再置于10～18℃环境下干燥1～2小时，得到冻干粉。

5.根据权利要求3所述的常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂，其特征在于，在反应液中，各组份的浓度范围如下：

重组酶520-725ng/μl；单链DNA结合蛋白100-200ng/μl；DNA聚合酶350-450ng/μl；核酸外切酶300-400ng/μl。

6.根据权利要求5所述的常温等温快速检测副溶血弧菌的试剂，其特征在于，在反应液中，各组份的浓度范围如下：

聚乙二醇，4-5％；Tris，20-30mM；乙酸钠，200-240mM；二硫苏糖醇，8-10mM；酸磷酸腺苷，8-10mM；磷酸肌酸二钠盐，80-100mM；磷酸肌酶，80-120ng/μl；脱氧核糖核苷三磷酸，450-500μM；海藻糖，10-12％；甘露醇，40-50ng/μl。

7.一种通过如权利要求3～6任一项所述试剂实现的常温等温快速检测副溶血弧菌的方法，其特征在于，所述方法包括：

在装有所述试剂的反应管中加待检样本、双蒸水和缓冲液；

置于一温控设备中孵育15～25分钟，再通过具备荧光检测功能的仪器进行可视化检测，检测过程保持反应管密闭。

8.根据权利要求7所述的常温等温快速检测副溶血弧菌的方法，其特征在于，所述温控设备保持一恒定温度值，且该恒定温度值在20-39℃范围内。