[发明专利]一种苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法、应用

权利要求书

1.一种苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，所述苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法包括以下步骤：

第一步，楸子外植体的选择与接种：将消毒后的嫩芽接种到初代培养基中，将接种好的外植体放在光照16h/d，光强2000lux，室温23℃～25℃的环境下培养；

第二步，增殖扩繁：将步骤一得到的组培分株苗取出，切除愈伤组织和底部叶片，接种到继代培养基中，组培瓶放在光照16h/d，光强2000lux，室温23℃～25℃的环境下培养；

第三步，无糖生根培养：将蛭石和营养液倒入无糖培养盒中，混匀；选取步骤二后得到的长势良好的楸子组培苗，切除愈伤组织和底部叶片，接种到无糖培养盒中；将培养盒放到无糖培养专用培养架上，通入二氧化碳气体，在光照16h/d，室温23℃～25℃，光强2000lux的环境下进行无糖生根培养。

2.如权利要求1所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，所述第一步还包括：以苹果砧木楸子为外植体材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于2月～3月采集两一年生枝条，放置在26℃的室温下进行水培，每隔5d换一次水，并剪掉旧剪口；当水培枝条上的芽抽生为1.5cm～2.0cm时，剪取嫩芽，去除木质化部分以及展开的幼叶，并放在自来水下冲洗6h～8h。

3.如权利要求2所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，在超净工作台中，将冲洗后的嫩芽放入0.1％的升汞溶液中消毒8分钟，期间震荡摇晃，其后将嫩芽取出放入70％酒精中消毒30秒，最后放入无菌水中冲洗3遍～5遍，直到无菌水中不产生泡沫为止。

4.如权利要求3所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，将消毒后的嫩芽接种到初代培养基中；将接种好的外植体放在光照16h/d，光强2000lux，室温23℃～25℃的环境下培养30d～40d。

5.如权利要求4所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，培养基为：MS+30g/L蔗糖+7～8g/L琼脂+0.6～1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA，pH5.8左右，在培养基中添加3g/L的活性炭或Vc、PVP等抗氧化剂。

6.如权利要求1所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，所述第二步还包括：初代外植体培养30d～40d后，进行继代扩繁培养；在超净工作台中，将幼苗取出，切除愈伤组织和底部叶片，接种到继代培养基中，接种好的外植体放在光照16h/d，光强2000lux，室温23℃～25℃的环境下培养30d～40d。

7.如权利要求6所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，继代培养基为：MS+30g/L蔗糖+7～8g/L琼脂+0.6～1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA，pH5.8左右。

8.如权利要求1所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，所述第三步还包括：组装无糖培养盒，并将蛭石放入121℃高温高压灭菌锅中灭菌21min，取出后在65℃烘干箱中烘12h，在无菌条件下称取400g/盒；配置营养液933ml/盒，营养液为：1/2MS+1.0～1.5mg/L IBA，pH5.8左右。

9.如权利要求6所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法，其特征在于，在超净工作台中，将准备的蛭石和营养液倒入无糖培养盒中，混匀，得到含水量70％的无糖培养基；选取生长30d～40d、带有5片及以上叶片、长势良好的楸子幼苗，切除愈伤组织和底部叶片，接种到无糖生根培养基中；将接种好的幼苗在室温23℃～25℃下暗培养3d，3d后将幼苗放到无糖培养专用培养架上，通入浓度为800ppm～1200ppm的二氧化碳气体，在光照16h/d，室温23℃～25℃，光强2000lux的环境下进行无糖生根培养，培养时间为30d。

10.一种如权利要求1～9任意一项所述的苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法在苹果苗木繁殖中的应用。