[发明专利]心肌细胞的分离试剂和分离方法

权利要求书

1.一种心肌细胞分离方法，其不包括氧合步骤，且包括以下步骤：

预处理步骤，其中将离体心肌组织浸于预处理液中进行破碎；

清洗脱钙步骤，其中使用清洗脱钙液对预处理步骤之后获得的心肌组织进行清洗以使其脱钙，所述清洗脱钙液包含BLEB和/或PAB或其生理学上可接受的盐、能量成分、代谢调节剂、酸碱调节剂、等渗剂、抗生素，且不使用梯度脱钙法进行脱钙；

消化步骤，其中使用含有酶的消化液将细胞间的间质成分消解；；

平衡步骤，其中使用平衡液进行平衡，所述平衡液含有BLEB和/或PAB或其生理学上可接受的盐、钾离子、氨基酸、螯合剂、能量成分、代谢调节剂、酸碱调节剂、等渗剂、抗生素；

滴液复钙步骤，其中向平衡后的细胞悬液中分若干次加入复钙液，每次加入复钙液之后轻轻吹打、振荡而不需要离心，然后再加入下一次的复钙液，由此使心肌细胞中的钙浓度恢复正常水平，其中所述复钙液是通过向所述清洗脱钙液中添加钙离子得到的，所述复钙液中钙离子的浓度为5-200mM。

2.根据权利要求1所述的方法，其中使用作为所述预处理液。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述预处理液中含有BLEB和/或PAB或其生理学上可接受的盐。

4.根据权利要求3所述的方法，其中BLEB或其生理学上可接受的盐的浓度为1-50μM；PAB或其生理学上可接受的盐的浓度为1-100μM。

5.根据权利要求4所述的方法，其中BLEB或其生理学上可接受的盐的浓度为5-20μM。

6.根据权利要求4所述的方法，其中BLEB或其生理学上可接受的盐的浓度为8-15μM。

7.根据权利要求4所述的方法，其中BLEB或其生理学上可接受的盐的浓度为10-20μM。

8.根据权利要求4所述的方法，其中PAB或其生理学上可接受的盐的浓度为3-60μM。

9.根据权利要求4所述的方法，其中PAB或其生理学上可接受的盐的浓度为5-50μM。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述清洗脱钙液或平衡液中的BLEB或其生理学上可接受的盐的浓度为1-50μM。

11.根据权利要求10所述的方法，其中BLEB或其生理学上可接受的盐的浓度为5-20μM。

12.根据权利要求10所述的方法，其中BLEB或其生理学上可接受的盐的浓度为8-15μM。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述清洗脱钙液或平衡液中的PAB或其生理学上可接受的盐的浓度为1-100μM。

14.根据权利要求13所述的方法，其中PAB或其生理学上可接受的盐的浓度为3-60μM。

15.根据权利要求13所述的方法，其中PAB或其生理学上可接受的盐的浓度为10-20μM。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述清洗脱钙液或平衡液中的能量成分为葡萄糖，其浓度为1-100mM。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述葡萄糖的浓度为10-50mM。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述葡萄糖的浓度为20-25mM。