[发明专利]一种检测混合益生菌产品中乳杆菌数的方法

说明书

本发明公开了一种检测混合益生菌产品中乳杆菌数的方法，包括步骤（1）称取混合益生菌样品，加入无菌生理盐水，均质；（2）取样品匀液，加入无菌生理盐水，依次递增稀释至适宜稀释度；（3）吸取适宜稀释度的样品匀液于无菌培养皿内,将MRS琼脂培养基倾注入培养皿，混合均匀，35‑37℃有氧培养70‑72h，培养后计数平板上的所有菌落数即得。本发明采用有氧培养乳杆菌的方式，使计数培养基上仅乳杆菌生长，抑制双歧杆菌的生长，去除了双歧杆菌对乳杆菌数检测的干扰，从而能够准确的检测出混合益生菌产品中乳杆菌数，对混合益生菌中乳杆菌活菌数实现有效的检测和控制，此方法可以填补对含有双歧杆菌和乳杆菌的混合益生菌中乳杆菌数检测的空缺。

技术领域

本发明属于保健品技术领域，具体涉及一种检测混合益生菌产品中乳杆菌数的方法。

背景技术

益生菌具有调节肠道菌群的平衡、抑制肠道致菌的感染、防治肿瘤、降低血清胆固醇水平、促进消化、提高机体免疫功能等健康功效，被广泛地应用于发酵制品和生物制品领域。益生菌数量是产品发挥益生功效的重要条件，在产品的安全性和功能性试验中也常以益生菌数量为评价指标。因此，益生菌数检测对企业质量控制和日常监督至关重要。

GB 4789.35-2010食品安全国家标准《食品微生物学检验乳酸菌检验》中有规定混合益生菌中乳杆菌的检验方法，该检验方法是在通过MRS培养基厌氧36℃±1℃培养48h±2h得到乳酸菌总数，改良MRS培养基厌氧36℃±1℃培养48h±2h得到双歧杆菌（改良MRS培养基为添加莫匹罗星锂盐的MRS培养基），然后用乳酸菌总数减去双歧杆菌计数即得乳杆菌计数。该检验方法存在会检验出负值和结果偏差大的缺陷，无法进行准确的检测。

目前益生菌的检验方法主要按GB 4789.35-2016 食品安全国家标准《食品微生物学检验乳酸菌检验》检验，该检验方法规定了单一乳杆菌的样品采用MRS培养基36℃±1℃厌氧培养72h±2h计数得到，但该检验方法没有规定混合益生菌中乳杆菌的检测和计数方法。

因此，有必要研究一种检测混合益生菌产品中乳杆菌数的方法，以有效检测乳杆菌的数量，保证产品质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测混合益生菌产品中乳杆菌数的方法，该方法能够有效、准确的检测出混合益生菌产品中乳杆菌数，有利于实现对混合益生菌产品中乳杆菌数进行有效的检测和控制。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种检测混合益生菌产品中乳杆菌数的方法，所述混合益生菌产品含有双歧杆菌和乳杆菌，包括以下步骤：

（1）称取混合益生菌样品，加入无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液，均质，得到样品匀液；

（2）取样品匀液，加入无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液，依次递增稀释至适宜稀释度，得到适宜稀释度的样品匀液；

（3）吸取适宜稀释度的样品匀液于无菌培养皿内,将MRS琼脂培养基倾注入培养皿，混合均匀，35-37℃有氧培养70-72h，培养后计数平板上的所有菌落数即得到乳杆菌数。

优选的，所述步骤（1）的方法具体如下：称取混合益生菌样品25g，加入255mL无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液，均质3-6min，得到样品匀液。

优选的，所述步骤（2）的方法具体如下：取样品匀液1mL，加入9mL无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液，依次10倍递增稀释至适宜稀释度，得到适宜稀释度的样品匀液。

优选的，所述步骤（3）的方法具体如下：选择2-3个连续的适宜稀释度的样品匀液，每个稀释度样品匀液吸取1mL于无菌培养皿内, 每个稀释度做两个平皿，将冷却至48 ℃的MRS琼脂培养基倾注入平皿至15mL，混合均匀，35-37℃有氧培养70-72h，从样品稀释到平板倾注应在15min内完成，培养后计数平板上的所有菌落数即得到乳杆菌数。