[发明专利]一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法

权利要求书

1.一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

S1：从工作细胞库中取出杂交瘤细胞，采用快速融化法将种子细胞由液氮迅速转入到37℃水浴复苏，以无血清杂交瘤细胞培养液在125ml摇瓶中进行细胞扩大培养；

S2：将生物反应器彻底清洗、高温高压灭菌后安装调试，校正pH电极与溶氧电极，分别开启空气、氧气、氮气和二氧化碳四种气体的供气装置，设定生物反应器培养条件：温度36～37℃、pH值6.75～6.95、溶氧20～50%、搅拌桨转速60～100转/分钟；

S3:当生产细胞种子增殖达到合适总量，细胞终浓度在8×10⁵～1×10⁶cell/ml范围内时，此时将细胞种子接种到生物反应器中的储液箱(12)内，并启动生物反应器；

S4：待细胞增殖进入对数中期24小时时，取样计数并留样做效价检测，按总体积4%流加无血清培养基，之后每24小时取样计数并留样做效价检测，按总体积4%流加无血清培养基，直到样品血凝抑制效价达到1:2560以上时收获培养液；

S5：当培养液培养完成后对培养液进行收集，对收集后的培养液经过除菌过滤、无菌配制、定量分装到灭菌容器中即得到犬细小病毒单克隆抗体；

其中，所述生物反应器包括储流仓(1)和反应仓(2)；所述反应仓(2)上表面通过斜板(11)固连有储流仓(1)；所述储流仓(1)包括储液箱(12)和集液箱(19)；所述储流仓(1)内壁中设有支撑板(13)，且支撑板(13)为弧形设计；所述储液箱(12)上方套接有储液盖(16)，且储液盖(16)下表面安装有压力阀(211)；所述储液箱(12)外表面固连有集液箱(19)；所述储液箱(12)内壁中开设有均匀布置的第一通孔(17)，且第一通孔(17)均与集液箱(19)连通；每个所述第一通孔(17)内壁中均固连有控制阀，且控制阀在初始状态下为关闭设置；所述反应仓(2)包括反应箱(21)，且反应箱(21)为“工”字形设计；所述反应箱(21)底部端面固连有反应池(294),且反应池(294)为圆弧形设计；所述反应箱(21)上表面固连有电机(22)，且电机(22)通过导线与控制器电连接；所述电机(22)驱动轴上固连有圆杆(23)，且圆杆(23)穿过反应箱(21)延伸至反应池(294)内；所述圆杆(23)伸入反应箱(21)内的一侧外表面固连有第一搅拌桨(24)；所述圆杆(23)伸入反应池(294)内的一侧外表面固连有第二搅拌桨(25)；所述第一搅拌桨(24)周围与反应箱(21)内壁中通过转轴转动连接有均匀布置的第一转叶(26)；所述反应箱(21)内壁中安装有均匀布置的第一导管(291)，且第一导管(291)均为弹性设计；每个所述第一导管(291)另一端均延伸至储液箱(12)内并置于支撑板(13)上方，第一导管(291)均与第一搅拌桨(24)相互对应，所述反应池(294)底部中心位置安装有进气管(295)，且进气管(295)用于通入空气、氧气、氮气和二氧化碳四种气体；

所述圆杆(23)上端延伸至储液箱(12)内，并与支撑板(13)固连；所述支撑板(13)与储液箱(12)为转动连接；所述圆杆(23)内壁中开设有圆槽(27)，且圆槽(27)贯穿圆杆(23)设计；所述第一搅拌桨(24)的桨叶内壁中均开设有长槽(28)，且长槽(28)均与圆槽(27)连通，所述长槽(28)内壁中开设有均匀布置的圆孔(29)；所述第一搅拌桨(24)与第二搅拌桨(25)的内部结构完全相同；

每个所述第一导管(291)空腔内与反应箱(21)内壁中均安装有第二导管(292)，且第二导管(292)另一端均延伸至集液箱(19)上方空腔内；所述第二导管(292)伸入集液箱(19)内的管头处安装有单向阀；所述储液箱(12)内壁为橡胶材料制成；所述储液箱(12)内壁中固连有厚度为一到两厘米的锯齿状记忆合金(221)；每个所述第二导管(292)内壁中均开设有均匀布置的小孔(293)；所述集液箱(19)上方内壁中固连有注液阀(191)。

2.根据权利要求1所述的一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法，其特征在于：所述支撑板(13)上表面固连有均匀布置的搅拌杆(14)；每个所述搅拌杆(14)外表面均固连有螺旋叶(15)。