[发明专利]一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法

说明书

本发明属于犬细小病毒单克隆抗体技术领域，具体的说是一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法；所述生物反应器包括储流仓和反应仓；所述反应仓上表面通过斜板固连有储流仓；所述储流仓包括储液箱和集液箱；所述储流仓内壁中设有支撑板，且支撑板为弧形设计；所述储液箱上方套接有储液盖；所述储液箱外表面固连有集液箱；所述储液箱内壁中开设有均匀布置的第一通孔；每个所述第一通孔内壁中均固连有控制阀；本发明主要用于解决现有的生物反应器培养杂交瘤细胞生产犬细小病毒单克隆抗体的技术培养的细胞密度较低，培养的抗体效价较低，产品需要进行浓缩并且培养中需要添加血清，使下游工艺变得复杂，增加了副反应风险的问题。

技术领域

本发明属于犬细小病毒单克隆抗体技术领域，具体的说是一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法。

背景技术

犬细小病毒病（canine parvovirus disease，CPVD）是由犬细小病毒（canineparvovirus，CPV）感染引起的病毒性传染病，该病主要有两种临床表现性，一种是出血性肠炎型，表现为剧烈呕吐、血便、白细胞大量减少；一种是非化脓性心肌炎型，病犬会突然死亡。该病传播速度快，发病率高，幼犬的死亡率高达70%，成年犬死亡率相对较低但是隐性带毒的现象普遍存在。1978年，Kelly等首次从患出血性肠炎的病犬体内分离到CPV，随后，世界上很多国家和地区陆续报道本病的流行。1982年，梁士哲等最早报道中国出现类似CPV所致的犬出血性肠炎；1983年，徐汉坤等人正是分离到CPV。自此，CPVD迅速在我国东北、华北、南方等地区犬群中发生和蔓延，给养犬业的健康发展带来了具大的危害。

目前犬细小病毒病的治疗方法主要有对症疗法、补液疗法、禁饮禁食疗法和特异性疗法等。近年来，单克隆抗体技术也被广泛的应用于动物传染病研究的各个领域。与高免血清相比，单克隆抗体具有特异性强、质地均一、效价高、可以快速、大量、无限地生产等优点。但是目前生产的单抗大多是鼠源性的，在临床应用方面还存在着很大的弊端。主要是因为鼠源单抗与 NK 等免疫细胞表面 Fc段受体亲和力弱，产生的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)较弱，而且它与补体成分结合能力低，对肿瘤细胞的杀伤能力较弱，并且鼠源性抗体在人血循环中的半衰期短，它发挥 ADCC 作用的时间较短；其次鼠单克隆抗体还具有免疫原性，易引起宿主过敏反应。这样一方面降低了单抗的效价，另一方面又会给病患带来严重的后果，因此鼠源性单克隆抗体还应改善才能应用于临床。这促使人们继续努力，探索更为理想的抗体生产技术。关于犬细小病毒单克隆抗体的介绍，可参见刊期：周灵，犬细小病毒抗原及抗体检测方法的建立，吉林农业大学，2017（12），但是，目前的犬细小病毒单克隆抗体的培养方法仍存在一定的问题，具体包括以下方面：

现有的生物反应器培养杂交瘤细胞生产犬细小病毒单克隆抗体的技术培养的细胞密度较低，培养的抗体效价较低，产品需要进行浓缩并且培养中需要添加血清，使下游工艺变得复杂，增加了副反应风险。

本发明中发现，可以采用生物反应器流加培养的方式高密度培养杂交瘤细胞来生产高效价治疗性犬细小病毒单克隆抗体。通过这样的方法生产的治疗性犬细小病毒单克隆抗体效价高，无血清培养使副反应风险降低，简化了下游工艺，显著提高治疗性单克隆抗体的质量。

鉴于此，为了克服上述技术问题，本公司设计研发了一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法，其中包括在生物反应器中高密度培养分泌抗犬细小病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及收获所述抗犬细小病毒单克隆抗体，解决了上述技术问题。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明提出的一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法，本发明主要用于解决现有的生物反应器培养杂交瘤细胞生产犬细小病毒单克隆抗体的技术培养的细胞密度较低，培养的抗体效价较低，产品需要进行浓缩并且培养中需要添加血清，使下游工艺变得复杂，增加了副反应风险的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利用高密度培养方式生产犬细小病毒单克隆抗体的方法，该方法包括以下步骤：