[发明专利]一种肿瘤细胞培养信息分析方法

权利要求书

1.一种肿瘤细胞培养信息分析方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、肿瘤细胞培养，提供肿瘤细胞作为起始细胞，肿瘤细胞来自相同对象的相同肿瘤组织，将肿瘤细胞放入到培养基中进行培养，将培养样品分为一类、二类及三类，作为后续的信息对比；

S2、药理培养，首先将血管内皮细胞接种于培养容器的渗透支持膜上形成血管内皮细胞层；起始细胞放置于渗透支持膜血管内皮细胞层上方并形成半固态凝胶状的混合体，在对一类、二类及三类培养过程中，对样品中添加抗肿瘤药物，培养后收集培养容器的细胞液，对其进行细胞计数，根据培养容器的细胞数量可检测出细胞迁移能力的强弱；

S3、细胞膜磷脂提取，在肿瘤细胞培养完成之后，将培养基去除，取出肿瘤细胞液，对肿瘤细胞细胞膜磷脂的提取，将收集的细胞悬浮于PBS中，将细胞悬浮液于超声波细胞粉碎机中于冰浴条件下破膜30分钟，取一定体积的破膜液于甲醇与氯仿的混合液中，震荡摇匀，室温静置，离心取下相；

S4、细胞膜磷脂甲酯化，向细胞膜磷脂提取液中加入氢氧化钾-甲醇溶液，进行甲酯化，得到甲酯化的脂肪酸，再加入盐酸，振摇，静置，加入适量的无水硫酸钠干燥，取下层清液待测；

S5、气相技术分析，将步骤3中提取的清液进行气相分析，对一类、二类及三类样品制作图谱；

S6、信息对比，对细胞特征信息、细胞特征差异进行对比，得出分析结果。

2.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞培养信息分析方法，其特征在于：所述S1中培养基由10％的无细胞腹水、3％的胎牛血清、1％的双抗，其余为DMEM培养基组成。

3.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞培养信息分析方法，其特征在于：所述S3中在震荡摇匀时，在离心管中富集磁珠，2-8℃条件下，旋转结合20-40min；再将离心管放置磁体上3min，将上清液移除，得到磁珠悬浮液。

4.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞培养信息分析方法，其特征在于：所述S2中的渗透支持膜采用有机材料制成。

5.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞培养信息分析方法，其特征在于：所述S1中样品的一类、二类及三类分别对应肿瘤细胞的早期细胞、中期细胞及晚期细胞。

6.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞培养信息分析方法，其特征在于：所述S6中的细胞特征差异包括：单个或多个基因甲基化水平的差异、单个或多个基因组区域甲基化水平的差异。

7.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞培养信息分析方法，其特征在于：所述S3中在去除培养基，洗涤细胞沉淀后加入细胞消化液，当间质细胞收缩变圆但上皮细胞还未收缩时，轻拍敲打培养瓶使间质细胞脱离，去除间质细胞。

8.根据权利要求1所述的一种肿瘤细胞培养信息分析方法，其特征在于：所述S2中在培养过程中，培养温度设置为36.5℃。