[发明专利]一种肿瘤细胞培养信息分析方法

说明书

本发明公开了一种肿瘤细胞培养信息分析方法，包括以下步骤：肿瘤细胞培养、药理培养、细胞膜磷脂提取、细胞膜磷脂甲酯化、气相技术分析、信息对比。将血管内皮细胞接种于培养容器的渗透支持膜上形成血管内皮细胞层；起始细胞放置于渗透支持膜血管内皮细胞层上方并形成半固态凝胶状的混合体，在对一类、二类及三类培养过程中，对样品中添加抗肿瘤药物，培养后收集培养容器的细胞液，对其进行细胞计数，根据培养容器的细胞数量可检测出细胞迁移能力的强弱。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，更具体地说，尤其涉及一种肿瘤细胞培养信息分析方法。

背景技术

恶性肿瘤已经成为严重威胁人类生命健康的主要疾病之一，具有高发病率和高致死率的特点，肿瘤的发生日益影响经济发展和人们的健康。因此，采取有效的防治肿瘤的方法，遏制恶性肿瘤的发展势头迫在眉睫。

很多疾病包括肿瘤都伴有膜磷脂代谢的变化，细胞膜磷脂的变化会影响细胞膜的理化性质，进而影响各种膜蛋白的生物学功能。研究细胞膜磷脂的变化不仅有助于阐明这些疾病及肿瘤的发病机理，而且有助于疾病的诊断和治疗。由于细胞膜磷脂周转速率极快，随细胞死亡而迅速降解并且不同肿瘤细胞的脂肪酸的结构与种类不尽相同。由于检测技术的限制，膜脂分析多限于对整体脂类总量的分析鉴定，由于不同脂肪酸色谱峰的重叠，对不同肿瘤细胞磷脂组成差异的研究较困难。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种肿瘤细胞培养信息分析方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种肿瘤细胞培养信息分析方法，包括如下步骤：

S1、肿瘤细胞培养，提供肿瘤细胞作为起始细胞，肿瘤细胞来自相同对象的相同肿瘤组织，将肿瘤细胞放入到培养基中进行培养，将培养样品分为一类、二类及三类，作为后续的信息对比；

S2、药理培养，首先将血管内皮细胞接种于培养容器的渗透支持膜上形成血管内皮细胞层；起始细胞放置于渗透支持膜血管内皮细胞层上方并形成半固态凝胶状的混合体，在对一类、二类及三类培养过程中，对样品中添加抗肿瘤药物，培养后收集培养容器的细胞液，对其进行细胞计数，根据培养容器的细胞数量可检测出细胞迁移能力的强弱；

S3、细胞膜磷脂提取，在肿瘤细胞培养完成之后，将培养基去除，取出肿瘤细胞液，对肿瘤细胞细胞膜磷脂的提取，将收集的细胞悬浮于PBS中，将细胞悬浮液于超声波细胞粉碎机中于冰浴条件下破膜30分钟，取一定体积的破膜液于甲醇与氯仿的混合液中，震荡摇匀，室温静置，离心取下相；

S4、细胞膜磷脂甲酯化，向细胞膜磷脂提取液中加入氢氧化钾-甲醇溶液，进行甲酯化，得到甲酯化的脂肪酸，再加入盐酸，振摇，静置，加入适量的无水硫酸钠干燥，取下层清液待测；

S5、气相技术分析，将步骤3中提取的清液进行气相分析，对一类、二类及三类样品制作图谱；

S6、信息对比，对细胞特征信息、细胞特征差异进行对比，得出分析结果。

优选的，所述S1中培养基由10％的无细胞腹水、3％的胎牛血清、1％的双抗，其余为DMEM培养基组成。

优选的，所述S3中在震荡摇匀时，在离心管中富集磁珠，2-8℃条件下，旋转结合20-40min；再将离心管放置磁体上3min，将上清液移除，得到磁珠悬浮液。

优选的，所述S2中的渗透支持膜采用有机材料制成。

优选的，所述S1中样品的一类、二类及三类分别对应肿瘤细胞的早期细胞、中期细胞及晚期细胞。

优选的，所述S6中的细胞特征差异包括：单个或多个基因甲基化水平的差异、单个或多个基因组区域甲基化水平的差异。