[发明专利]小鼠CT26结直肠癌治疗性肿瘤多肽疫苗制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种小鼠CT26结直肠癌治疗性肿瘤多肽疫苗制剂，其特征在于，所述多肽疫苗制剂中包含：

a.抗原表位组合物，所述抗原表位组合物包括7条CT26 CD8 T细胞表位的多肽片段与4条CT26 CD4 T细胞表位的多肽片段；所述7条CT26 CD8 T细胞表位的多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1-7所示；所述4条CT26 CD4 T细胞表位的多肽片段的氨基酸序列如SEQ IDNO：8-11所示；

b.佐剂；所述佐剂为：聚肌苷酸-聚胞嘧啶核苷酸poly I:C。

2.根据权利要求1所述的多肽疫苗制剂的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

I、对CT26肿瘤细胞进行全外显子测序和mRNA基因表达量测序；

II、分析测序数据，对突变的多肽序列进行CD8T细胞表位预测，挑选出排名前20的突变序列，并合成多肽片段；

III、将步骤(II)中的20条突变多肽片段混合，与佐剂混合，免疫小鼠，筛选出7条具有免疫原性的突变抗原的CD8 T细胞表位的多肽片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1-7所示；

IV、将步骤(III)中选取出的7条CD8 T细胞表位的多肽片段与4条如SEQ ID NO：8-11所示的CT26 CD4 T细胞表位的多肽片段等质量混合形成多肽混合液，添加佐剂，形成多肽疫苗制剂；

所述佐剂为：聚肌苷酸-聚胞嘧啶核苷酸poly I:C。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤IV中所述多肽疫苗制剂的配制具体方法为：将16mg/mL的多肽混合液与0.5mg/mL的佐剂稀释液以1:1等体积混合，制作成多肽疫苗混悬液制剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述多肽混合液的配制方法为：每条多肽片段用DMSO配制成50mg/mL的母液，再将所有多肽的母液等量地混合在一起，用PBS溶解配置成16mg/mL的多肽混合液；所述佐剂稀释液的配制方法为：长度1.5-8kb商品化的Poly I:C的粉末用无热源的去离子水配制成1mg/mL的母液，65-70℃水浴10分钟溶解，室温放置1小时冷却；Poly I:C母液用PBS稀释成0.5mg/mL的稀释液。